在試驗條件（包括ELISA試劑盒）較難確保穩定的情況下，這種判別法較為適宜。在得出標本（S）和陰性對照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性（positive），而是病人（patient）的縮寫，不該誤解。為防止混雜，更宜用S/N表明。在早期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽性規范，現多為各種測定所沿襲。
ELISA試劑盒實際上每一測定體系應該用試驗求出各自的S/N的閾值。更應留意的是ELISA試劑盒，N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液，致使反響后發生的本底可能較正常人血清的本底低得多。
因而，這類ELISA試劑盒規則，如N<0.05（或別的數值），則按0.05核算，不然將呈現假陽性成果。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規則的溫度，特別是在氣溫較低的時分更應如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，約束在規則的范圍內，規范室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據說明書的要求操控溫育。室溫溫育時，ELISA試劑盒板只需平置于操作臺上即可。應留意溫育的溫度和時刻。為確保這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板一起測定。