植物總DNA的快速少量抽提實驗
實驗方法原理 CTAB法：該方法簡便、快速，DNA產(chǎn)量高(純度稍次，適用于一般分子生物學操作)。 CTAB是一種非離子去污劑，植物材料在CTAB的處理下，結(jié)合65 °C水浴使細胞裂解、蛋白質(zhì)變性、DNA被釋放出來。CTAB與核酸形成復合物，此復合物在高鹽（>0.7 mM）濃度下可溶，并穩(wěn)定存在，但在低鹽濃度（0.1-0.5 mM NaCl）下CTAB-核酸復合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白質(zhì)及多糖等仍溶解于溶液中。經(jīng)離心棄上清后，CTAB-核酸復合物再用70－75%酒精浸泡可洗脫掉CTAB。再經(jīng)過氯仿/異戊醇(24:1) 抽提去除蛋白質(zhì)、多糖、色素等來純化DNA，zui后經(jīng)異丙醇或乙醇等DNA沉淀劑將DNA沉淀分離出來。
實驗材料 水稻葉片
試劑、試劑盒 液氮CTAB氯仿異戊醇乙醇NH4ACEtOH
儀器、耗材 離心管離心機
實驗步驟
1. 采集適量幼嫩葉片，用液N2研成粉末，0.4 g裝入1.5 ml離心管中（-20 ℃預冷）。
2. 預熱1.5×CTAB到95 ℃，加1 ml到裝有葉片粉末的離心管中，混勻（防止凍融）。
3. 立即置于65 ℃水浴30min，每5分鐘，上下顛倒1次。
4. 12000 g離心5分鐘。
5. 吸取上清液約600 μl，加入等體積（600 μl）氯仿/異戊醇(24:1)，上下顛倒數(shù)次，至下層液相呈深綠色為止。
6. 12000 g離心5分鐘。
7. 取450 μl上清于一新1.5 ml離心管，加入1 ml 95%乙醇和45 μl 10 M NH4AC），混勻，室溫放置10min。
8. 12000 g離心10min，去上清，用75% EtOH浸洗沉淀，自然干燥約30 min。
9. 加入50 μl 1/10 TE或無菌水（含20 mM/RNase），置于4 ℃，待DNA溶解后，檢測DNA濃度及質(zhì)量。
收起
注意事項
1. 盡量取材幼嫩葉片，如太老，酚類物質(zhì)多，必須用10 mM的β-ME處理。
2. 研缽預凍，粉末至加CTAB前不要融化。
3. 24:1的氯仿/異戊醇抽提時動作應輕柔，轉(zhuǎn)移用的槍頭是剪寬了的。
4. 所用試劑必需滅菌，手套。
