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酵母菌基因組DNA的提取
一:儀器:同方法一 二:試劑:SE緩沖液(1M*,0.1MEDTA pH7.5);*(50mg/ml);20%PVP;蛋白酶K緩沖液(10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA);其余同前三:操作 1.5ml 對數生長期細菌細胞 離心,12000rpm,1-2min 沉淀 溶于590ulSE緩沖液中混勻+10ul*37℃,1hr 離心,12000rpm,8-10min 沉淀溶于100μL,0.5μl蛋白酶K,混勻,37℃,1hr 加入1.2ml的CTAB/NaCL,200μl20%PVP 混勻 65℃,30min等體積酚//異戊醇混合液,混勻,離心,12000rpm,4-5min 上清,上清液
2V無水乙醇、1/10VnaAC,
-20,2或-80℃,30min
10000RPM,10min
沉 淀
70%冷乙醇洗滌
真空干燥 干粉-20℃保存,
或復溶于0.5-1mlTE或水中,分裝成小體積, -20℃或4℃保存
四:鑒定
所提DNA進行Agarose膠分析(電泳過程見附),紫外觀測儀觀測,凝膠成像系統拍攝。
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