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酵母菌基因組DNA的提取

時間:2017-7-18閱讀:884
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酵母菌基因組DNA的提取

一:儀器:同方法一 二:試劑:SE緩沖液(1M*,0.1MEDTA pH7.5);*(50mg/ml);20%PVP;蛋白酶K緩沖液(10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA);其余同前三:操作  1.5ml  對數生長期細菌細胞         離心,12000rpm,1-2min       沉淀         溶于590ulSE緩沖液中混勻+10ul*37℃,1hr             離心,12000rpm,8-10min           沉淀溶于100μL,0.5μl蛋白酶K,混勻,37℃,1hr              加入1.2ml的CTAB/NaCL,200μl20%PVP 混勻  65℃,30min等體積酚//異戊醇混合液,混勻,離心,12000rpm,4-5min          上清,上清液 
2V無水乙醇、1/10VnaAC, 
-20,2或-80℃,30min 
                                 10000RPM,10min 
沉 淀  
70%冷乙醇洗滌 
真空干燥 干粉-20℃保存, 
或復溶于0.5-1mlTE或水中,分裝成小體積, -20℃或4℃保存 
 
四:鑒定  
所提DNA進行Agarose膠分析(電泳過程見附),紫外觀測儀觀測,凝膠成像系統拍攝。 

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