ELSIA操作步驟復雜，影響反應因素較多，ON Elisa kit特別是固相載體的包被難達到各個體之間的*，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，ON Elisa kit中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

ON Elisa kit技術操作要點：

1. 標本的采取和保存。
2. 試劑的準備
3. 加樣。
4. 保溫。
5. 洗滌。
6. 顯色和比色。
7. 酶標比色儀。
8. 結果判斷。

將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。ON Elisa kit蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，其聯(lián)結多發(fā)生在Fc段上，抗體結合點暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，ON Elisa kit直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預包被，其后通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。可將聚苯乙烯板先經紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時），以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質，如聚賴氨酸、*等作預包被，也可提高核酸的結合力。也可用親和素*系統(tǒng)作間接包被，ON Elisa kit即用親和素先包被載體，然后加入*化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。

脂類物質無法與固相載體結合，可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般采用這種包被方式。

ON Elisa kit相關產品*：xyD353Mu    小鼠Slit同源物3(Slit3)檢測試劑盒    ELISA Kit for Slit Homolog 3 (Slit3)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyG895Mu    小鼠WNT1誘導信號通道蛋白1(WISP1)檢測試劑盒    ELISA Kit for WNT1 Inducible Signaling Pathway Protein 1 (WISP1)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyC874Mu    小鼠斯鈣素1(STC1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Stanniocalcin 1 (STC1)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyJ620Mu    小鼠細胞骨架活性調節(jié)蛋白(ARC)檢測試劑盒    ELISA Kit for Activity Regulated Cytoskeleton Associated Protein (ARC)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyC109Mu    小鼠生長分化因子3(GDF3)檢測試劑盒    ELISA Kit for Growth Differentiation Factor 3 (GDF3)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyC489Mu    小鼠膜鐵轉運蛋白(FPN)檢測試劑盒    ELISA Kit for Ferroportin (FPN)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyD876Mu    小鼠胰島素樣蛋白6(INSL6)檢測試劑盒    ELISA Kit for Insulin Like Protein 6 (INSL6)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyD993Mu    小鼠組織蛋白酶G(CTSG)檢測試劑盒    ELISA Kit for Cathepsin G (CTSG)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyE787Mu    小鼠膜聯(lián)蛋白A1(ANXA1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Annexin A1 (ANXA1)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyF420Mu    小鼠腓骨蛋白7(FBLN7)檢測試劑盒    ELISA Kit for Fibulin 7 (FBLN7)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyC524Mu    小鼠刺猬因子相互作用蛋白(HHIP)檢測試劑盒    ELISA Kit for Hedgehog Interacting Protein (HHIP)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyC418Mu    小鼠過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒    ELISA Kit for Catalase (CAT)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyA475Mu    小鼠*受體(VDR)檢測試劑盒    ELISA Kit for Vitamin D Receptor (VDR)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyC641Mu    小鼠微粒體甘油三酸酯轉運蛋白(MTTP)檢測試劑盒    ELISA Kit for Microsomal Triglyceride Transfer Protein (MTTP)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyE040Mu    小鼠圍脂滴蛋白4(PLIN4)檢測試劑盒    ELISA Kit for Perilipin 4 (PLIN4)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyC448Mu    小鼠肌營養(yǎng)不良蛋白關聯(lián)糖蛋白1(DAG1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Dystrophin Associated Glycoprotein 1 (DAG1)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyJ193Mu    小鼠雙特異性*磷酸化調節(jié)激酶1A(DYRK1A)檢測試劑盒    ELISA Kit for Dual Specificity Tyrosine Phosphorylation Regulated Kinase 1A (DYRK1A)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyH922Mu    小鼠亨廷頓蛋白(HTT)檢測試劑盒    ELISA Kit for Huntingtin (HTT)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyB366Mu    小鼠血管內皮鈣黏蛋白(CDH5)檢測試劑盒    ELISA Kit for Cadherin 5 (CDH5)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyA718Mu    小鼠β-位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(βACE1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Beta-Site APP Cleaving Enzyme 1 (bACE1)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyD523Mu    小鼠90kDa熱休克蛋白αA1(HSP90αA1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Heat Shock Protein 90kDa Alpha A1 (HSP90aA1)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml    
xyJ374Mu    小鼠幾丁質酶1(CHIT1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Chitinase 1 (CHIT1)     檢測范圍： 11.254-1000pg/ml