ELISA的原理和類型

ELISA的類型

    雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法，操作步驟如下：

1) 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。

2) 加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。

3) 加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。

4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測知標本中抗原的量。

   在臨床檢修中，此法合用于檢修各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步法檢測。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。

ELISA的原理

    ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既留存其免疫學活性，又留存酶的活性。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。因為酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。