小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒標(biāo)本的采集與保存:

1.         血清：

將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時(shí)或 4oC 過(guò)夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.         血漿：

用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 組織勻漿：

1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱(chēng)重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2） 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨，該過(guò)程需在冰上進(jìn)行（有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融 進(jìn)一步處理（超聲破碎過(guò)程中注意冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù)2次）。

3） 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測(cè)。

4. 細(xì)胞裂解液：

1）貼壁細(xì)胞需要先用yi酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）；

2）將收集到的細(xì)胞用冷PBS 洗3 次；

3）物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融）：

i 超聲破碎：取適量PBS 重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂。

ii 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20 oC 以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3 次，使細(xì)胞溶脹破碎。

4）將標(biāo)本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘，收集上清備用。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本：

請(qǐng) 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意：

1.         以上標(biāo)本均需密封保存，4oC保存應(yīng)小于1周，-20oC不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月，-80oC不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月。

2.         標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

3.         實(shí)驗(yàn)前紅細(xì)胞裂解液必須用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋。

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