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上海酶聯生物研究所
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上海酶聯生物研究所
閱讀：1474發布時間：2011-4-27
細胞培養的條件和要求
1.所有與細胞接觸的設備、器材和溶液等，都必須保持無菌，避免細胞外微生物的污染。
目前zui可靠和zui常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。
如：玻璃制品、布類、金屬制品：6.8kg20min。
橡膠制品：3.6～4.5kg10min。
培養用液，如Hanks液，水解乳蛋白：3.6～ 4.5kg10min。
實驗中染菌物品和動物尸體等：6.8 kg20min。
試管、吸管等，則可采用干熱滅菌；
一切不適于加熱滅菌的液體，如人工合成培養液、小牛血清、*等溶液，可采用過濾法除菌。
細胞培養中常用的消毒劑濃度及其使用場合
2.必須有足夠的營養供應，而不可有有害的物質，包括極微量的有害離子的摻入，為此必須注意器材的清洗和配液用水的質量。
細胞培養中對水的質量要求很高（見水處理）。
3.保證有適量的氧氣供應。
細胞代謝需要有空氣，否則細胞死亡。在用培養瓶進行靜止培養，或用轉瓶進行旋轉培養時，只要培養的液體量不超過總容量的30％，通過與液面的空氣交換，可以保證細胞有足夠的氧氣。當用罐子深層培養時，則必須通氣，一般采用含5％CO2的空氣，或根據需要將CO2、N2、O2和空氣以不同比例混合，過量氧對細胞的生長也不利。
4.需隨時清除細胞代謝中產生的有害產物。
細胞在代謝過程中會產生大量代謝廢物，如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等，這些產物對細胞的生存有害，必須及時清除。在小量培養時，當培養基中酚紅指示劑顯示黃色，表示已有相當量乳酸產生，要及時更換新鮮的培養基。在大量培養時，則需隨時測定葡萄糖和乳酸等含量，并調節灌流速度，使代謝產物保持在無害水平下。
5.有良好的適于其生存的外界環境，包括溫度、pH、滲透壓和離子濃度等。
不同的細胞對pH的要求不同，一般來說適于細胞生長的pH在6.8～7.4，過高或過低均不利于細胞生長。如上所述，細胞在代謝過程中會產生大量乳酸，使培養的pH下降。為了保持培養液的pH，常在培養液內加入各種緩沖系統，如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3（CO2）、Tricineglycine，以及加緩沖劑Hepes液（常用濃度為10～50mol/L）.
6.及時分種，保持合適的細胞密度
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