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上海酶聯生物研究所
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閱讀：902發布時間：2011-8-12
特異性抗體免疫磁珠分選、分離、純化原代細胞
用包被特異性抗體或抗IgG抗體的免疫磁珠分選、分離、純化原代細胞的方法。
可以在幾分鐘內從復雜的原代細胞混合物中分離出很高純度的目的原代細胞。
用包被特異性抗體或抗IgG抗體可以分離出非常純的原代細胞群體，而且有*的回收率和存活率。依據細胞頻率和標記表達水平的不同，原代細胞的純度可達95%-99.9%。 ?
基本原理：
已包被用包被特異性抗體磁珠與原代細胞表面相應分子特異性結合，或者抗IgG抗體磁珠與預先已與細胞表面分子特異結合的特異性抗體結合。磁珠攜帶與之結合的細胞吸附于分離柱/試管上，實現陽性細胞分離或陰性細胞分離。
基本分類：
免疫磁珠法分為陽性細胞分離法和陰性細胞法：
陽性細胞分離法－磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞。
陰性細胞分離法－磁珠結合不需要的細胞，游離于上清液的細胞為所需細胞。
一般而言，陰性細胞分離法比陽性細胞分離法的磁珠用量大。
基本步驟：
1、離心收集待分離細胞，用少量E孵育液（0.5％A、0.08％EDTA PH7.2 ，真空抽濾除菌及液體內氣體）充分混懸細胞（0.5ml/1×108細胞），包被特異性抗體磁珠或抗IgG抗體，4°C孵育30分鐘。
2、用20倍體積E洗細胞一次，再加E（0.3ml/1×108細胞）充分混懸細胞后，加入相應二抗包被的超微磁珠，混勻后置8～15°C孵育10～15分鐘。
3、將分離柱安裝入磁場中，加入0.5ml E，在重力作用下自然流盡，以預處理分離柱。
建議：
1、分離細胞全過程在超凈臺中完成。
2、超微磁珠及微小磁場系統適合于106-107細胞分離。
3、分離柱一般只能一次應用。
4、盡量去除死細胞。
5、細胞懸液加入分離柱中時，應將滴管伸至底壁后加入，避免將細胞懸液沿管壁流入。
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