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細胞內即時影像檢測共振傳感器誕生
點擊次數：359 發布時間：2011-6-27
開發了一個共振傳感器，來檢測細胞內的氧化還原動力學的即時影像。他在熒光半衰期影像顯微鏡研究領域獲得了許多重要的研究成果。其研究組在之前的研究中已建立了一系列的FTRET供體和受體熒光蛋白在氧化還原敏感開關。
將氧化還原敏感的綠色熒光蛋白（GFPs）的概念，轉化為FRET的成像平臺。以FRET為基礎的感應器的原理主要是應用氧化還原反應引起氧化還原敏感開關的構象變化，改變連接在這個開關的兩個熒光蛋白（供體和受體）間的距離，從而產生可被檢測的共振效率之改變。在氧化狀態下，感應器的熒光散射波長光譜紅移（由于受體熒光增加），這和局部感應器濃度變化或是激發光的強度無關。以FRET為基礎的感應器克服了一般以熒光強度為基礎的影像方法所衍生的障礙，因為只有能量轉移的效率改變時，FRET受體分子的熒光才會增加。FRET的這種特異性和可區別性的特征，是推動發展以共振為基礎，而不是只依賴單一組成的熒光強度變化作為分析方法的主要動機之一。
主要的突破在于改進光訊號的動態范圍，也就是說加強了氧化態和還原態之間的訊號差。增加光訊號的動態范圍使得探針更容易區別復雜的生物樣品中的氧化還原狀態。此外，新探針中較高的氧化中點電位是一個用來偵測哺乳類細胞中*氧化還原電位的理想工具。
以FRET為基礎的策略有以下的優點：（1）能夠量化氧化還原狀態的變化，（2）不依賴感應器的濃度，（3）模塊化設計，可以通過改變開關或模塊的熒光探針而地調整氧化還原敏感性和量測范圍。研究人員認為新開發的氧化還原敏感性探針可能是至關重要的一個工具來協助我們了解*藥物和氧化劑的藥理和毒理反應。一個以氧化還原敏感的螢光蛋白（roGFP）為基礎的新穎位差量測探針。利用roGFP感應器來量測需要有兩組被不同波長激發出來的螢光影像強度。利用兩組巰基在雙硫鍵形成/裂解的的氧化還原態之下，roGFP所產生的zui大激發光波長來求其比值。