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*A結合蛋白（CypA）三類Ig自身抗體的測定

閱讀：625發布時間：2011-6-25

*A結合蛋白（cyclophilinA，CypA）是生物細胞胞漿中的一種結構高度保守的低分子量蛋白（18 000），具有肽酰脯酰順反異構酶（pplase）活性，在細胞內蛋白質合成、折疊和轉運過程中起重要作用。因*A（CsA）具有選擇性免疫抑制作用而廣泛用于防治器官移植排斥反應，其效應的發揮主要是通過細胞內受體CypA的存在而起作用的。CsA與CypA結合后，即可影響mRNA的轉錄和某些蛋白質的表達，抑制T細胞的增殖與細胞因子的分泌。虞偉等利用基因重組技術，克隆表達出人CypA產物作為包被抗原，建立了檢測三類Ig抗體的間接ELISA方法，現將其方法簡要介紹如下。

操作步驟將重組人CypA（hcypA）抗原溶于pH9．6的0．05mol／LCBS緩沖液中，調整濃度至11ug／mL，包被聚苯乙烯反應板，100uL／孔，37℃ 1h后洗滌，加入l：50稀釋的待測血清，同時沒空白，陰性和陽性對照孔，43cC40min后洗滌，再分別加入HRP標記的抗人γαμ鏈抗體的F（ab’）2，43℃40min，洗后加底物（OPD-H202）溶液，37℃避光顯色5min，用2mol／LH：S04終止反應，空白調零，于492nm波長測吸光度（A）值。

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