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單個細胞產(chǎn)生細胞因子測定法

閱讀：564發(fā)布時間：2011-12-17

為了確定細胞因子的產(chǎn)生細胞，需在單個細胞培養(yǎng)條件下進行測定。常用的方法有反向溶血空斑試驗（reversehemolytic plaqueassay，RH-PA）和反向ELISA斑點試驗。

（1）反向溶血空斑試驗（RHPA）：RHPA是一種體外檢測抗體分泌細胞的試驗。其測定細胞因子分泌細胞的原理是將待測分泌細胞因子的細胞置于經(jīng)SPA包被的單層SRBC中，抗細胞因子抗體被SPA固定在SRBC表面并與待測細胞所分泌的細胞因子結合：在補體存在時，細胞因子和抗體的復合物激活補體，溶解附近的紅細胞形成溶血空斑。空斑的大小與細胞分泌細胞因子的量成正比。本試驗亦可用免疫化學方法染色溶血空斑中心的細胞以確定分泌細胞因子的細胞的類型：

（2）酶聯(lián)免疫斑點試驗（ELISPOT）：ELISPOT的原理是先將抗細胞因子抗體包被固相載體，再加入不同來源的細胞，待細胞分泌細胞因子后洗去細胞，然后加入相應的酶標抗細胞因子的抗體，即可通過與底物顯色反應的深淺測定結合在固相載體上的細胞因子量，并可在光鏡下觀察分泌細胞因子的細胞。如用蛋白質或肽激活T細胞，則可測定分泌細胞因子的抗原特異性T細胞。在試驗體系中，所用的包被抗體與酶標抗體應分別針對細胞因子的不同抗原決定簇。亦可將細胞因子分泌到可結合蛋白質的膜上，用免疫化學的方法測定結合到蛋白質膜上的細胞因子。

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