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蛋白質的表達、分離、純化實驗操作過程中的注意事項

閱讀：3070發布時間：2012-12-26

1. 選擇表達載體時，要根據所表達蛋白的zui終應用考慮。如為方便純化，可選擇融合表達；如為獲得天然蛋白，可選擇非融合表達。

2. 融合表達時在選擇外源DNA同載體分子連接反應時，對轉錄和轉譯過程中密碼結構的閱讀不能發生干擾。

3. 菌液OD值要小于1，否則細胞太濃太老，不易破碎，且質粒易丟失。

4. 誘導時間做一個梯度，不同蛋白誘導時間需摸索。

5. 誘導溫度適當摸索：25、30℃。

6. IPTG濃度：一般在1 mM 以內，可適當摸索。

7. 超聲條件可視實際情況改變，只要使菌體裂解充分即可，即菌液清亮不粘稠。

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