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技術(shù)文章

ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題處理方法

閱讀：386發(fā)布時(shí)間：2013-1-4

常見問題處理
出現(xiàn)問題			出現(xiàn)問題的原因		解決辦法
曲線	OD值不正常		試劑盒未回溫		試劑盒回溫到25℃
			溫度控制不好		控制正確溫度
			孵育時(shí)間不準(zhǔn)確		控制孵育時(shí)間
			洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長、洗滌次數(shù)增加		洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干
			陽光直射，對(duì)著風(fēng)直接吹		避風(fēng)避光
			酶標(biāo)儀的波長錯(cuò)誤		酶標(biāo)儀的波長450nm
			抗體的稀釋錯(cuò)誤		正確的稀釋抗體
			水質(zhì)問題		用娃哈哈礦泉水代替
	白板		洗滌液配制錯(cuò)誤		正確的配制洗滌液
			少加液體（抗體、酶標(biāo)記物、A液、B液）		正確的步驟加液體
			錯(cuò)加液體
	無梯度		標(biāo)準(zhǔn)品也污染		換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板
			OD值不正常		控制溫度時(shí)間在做一次
			人為點(diǎn)板		/
	線性不好		OD值不正常		控制溫度時(shí)間在做一次
			人為點(diǎn)板		/
回收率	空白管陽性高		樣本本身就是陽性樣本		換陰性樣本做回收率
			空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染		實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染
			水質(zhì)原因		用娃哈哈礦泉水代替
	偏高		添加量不準(zhǔn)確		的添加量
			添加濃度不適合		添加合適的濃度
			取液吹干量多		準(zhǔn)確的取液吹干
			取到其它相層液體		取需用相吹干
			復(fù)溶液未稀釋或加入量少		正確的稀釋復(fù)溶液
	偏低		添加量不準(zhǔn)確		的添加量
			添加濃度不適合		添加合適的濃度
			取液吹干量少		準(zhǔn)確的取液吹干
			復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或加入量多		正確的稀釋復(fù)溶液
出現(xiàn)問題		出現(xiàn)問題的原因			解決辦法
假陰、陽性		水質(zhì)原因		點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證	用娃哈哈礦泉水代替
		實(shí)驗(yàn)操作原因		吸取到其它相吹干	準(zhǔn)確的取液吹干
				離心不*	延長離心時(shí)間
				樣本的污染	更換樣本
				乳化未處理*	溫浴（70℃）處理乳化現(xiàn)象
		儀器試劑原因		離心管未清洗干凈	正確的洗滌器具
				有機(jī)溶劑的影響	做試劑空白看影響結(jié)果
		衍生化試劑原因（長時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)）			更換衍生化試劑
		與曲線好壞相關(guān)			保證曲線的正常
金標(biāo)檢測(cè)（T）線顏色較淺		尿液pH偏堿性			用0.01M HCl調(diào)節(jié)尿液pH值到7.0左右。
		尿樣滴加過多			重新測(cè)定，尿樣按照說明書，控制在2滴
		尿液過于混濁			將尿液離心后，取上清液重新測(cè)定
金標(biāo)質(zhì)控（C）線不出現(xiàn)		檢測(cè)卡由于高溫、受潮等原因失效			尿樣需要重新檢測(cè)。
		過了有效期失效。			該批號(hào)的金標(biāo)應(yīng)丟棄處理，尿液需要重新檢測(cè)
		操作過程中檢測(cè)卡沒有平放，導(dǎo)致液體樣品直接沖過檢測(cè)區(qū)			尿樣需要重新檢測(cè)，且檢測(cè)卡平放于桌面上再加樣。
		尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應(yīng)的物質(zhì)（比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等）			該尿液的檢測(cè)結(jié)果無效
金標(biāo)卡上在除了T和C線之外的其他地方出線		金標(biāo)卡上的劃痕；膠體金在跑板過程中沒有*跑干凈而在卡上的痕跡；			該檢測(cè)卡結(jié)果不可信，尿液需要重新檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)重復(fù)性不好		操作人員的不一致，取樣的不一致，樣本數(shù)量的多少，加樣時(shí)間的長短，洗滌條件不一致，加樣量不一致			盡量保持的實(shí)驗(yàn)一致性
分析軟件的使用		不能設(shè)置和保存			正確的設(shè)置和保存
		如何判斷曲線的好壞和分析結(jié)果			正確的判斷曲線的好壞和分析結(jié)果

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ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題處理方法

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