現(xiàn)在ELISA試劑盒除非是測(cè)定抗體的以外，一般使用的是雙抗體夾心法，此種方法大多數(shù)用的是增強(qiáng)的雙抗體夾心法，即使用*-親和素系統(tǒng)，還有少數(shù)的指標(biāo)可能使用競(jìng)爭(zhēng)法，這類(lèi)方法適用于半抗原的測(cè)定。

具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個(gè)抗體必須用單抗，否則背景很高。當(dāng)然如果兩個(gè)都是單抗(這兩個(gè)單抗針對(duì)不同表位)，那么測(cè)定的線性范圍就較寬，試劑盒性能就較好；一個(gè)用單抗，一個(gè)用多抗，測(cè)定的靈敏度會(huì)較高。

某些簡(jiǎn)單的化合物用ELISA試劑盒測(cè)定時(shí)，因?yàn)闆](méi)有兩個(gè)或以上的表位，一般只能作為半抗原，只能用競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定。如果你發(fā)現(xiàn)有測(cè)定簡(jiǎn)單化合物(如雌激素、NO等)用雙抗體夾心法作測(cè)定原理時(shí)，這個(gè)試劑盒你就要懷疑了。另外還要說(shuō)明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區(qū)別。

一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形，隨著待則標(biāo)本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測(cè)定吸光度即隨抗原濃度的增加而開(kāi)始下降直至不顯色，即所謂的“鉤狀效應(yīng)"(hookeHect)，也就是我們?cè)诿庖叱恋碓囼?yàn)中所稱的“帶現(xiàn)象"(zonephenomenon)。所以當(dāng)使用一步雙抗體夾心法時(shí)，樣品濃度太高，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)測(cè)不出來(lái)的現(xiàn)象，此時(shí)要作適當(dāng)?shù)南♂尣拍軠?zhǔn)確測(cè)定。

試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測(cè)定的方法時(shí)，ELISA試劑盒的組成一般包括： 已包被單抗的酶標(biāo)板：一塊，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，外面有鋁箔袋密封，打開(kāi)后有干燥劑，實(shí)驗(yàn)時(shí)暫未使用的酶標(biāo)條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。