原位雜交結合免疫組織化學技術可以分別在相鄰的連續切片上進行。只要在相鄰切片上能得到同一細胞的連續切面。對照觀察相鄰切片上同一細胞切面原位雜交和免疫組織化學結果,就可以判斷在同一細胞內是否存在特定的靶核酸DNA或RNA和由該基因或另一種基因編碼的蛋白質或多肽。
原位雜交結合免疫組織化學技術更多的是在同一細胞標本或組織切片上進行,這樣可避免因相鄰切片法觀察時不易找到同一細胞的切面而產生的空間誤差和樣本誤差。但采用同一切片的雙標記技術時。*次標記染色過程總要或多或少地影響第二次標記染色的結果,使第二次染色結果不很理想。
細胞和切片標本先用特異性抗體經免疫組織化學檢測其中的相應抗原成分.接著用核酸探針做原位雜交,顯示同一細胞或標本內的DNA或mRNA。免疫組織化學技術多用ABC法,顯色劑可用DAB、PPD(Para-phenylenediamine)或AEC(3―amino-9―ethyl-carbazole)。當與放射性核素的原位雜交結合時,DAB或PPD顯色所呈的棕褐色或棕黑色陽性產物在隨后的原位雜交的操作過程中比較穩定,不會褪色。如果用AEC作顯色劑,陽性產物呈紅色,它與原位雜交放射自顯影的陽性信號黑色銀粒對比更加鮮明,易于在同一細胞內分辨出來。但由于AEC的陽性產物能溶于乙醇等有機溶劑,因此在隨后的原位雜交操作過程中不能用乙醇脫水,可代之以空氣干燥。
免疫組織化學若與*等非放射性標記探針的原位雜交相結合。在選擇檢測系統時應考慮到兩個系統之間是否存在相互干擾。再者,在選用顯色劑時,免疫組織化學和原位雜交zui終的兩種成色陽性產物應易于分辨。
*行免疫組織化學反應。后進行原位雜交。通??乖茌^好地顯示,但靶核酸有可能在進行免疫組織化學的過程中易于遭到破壞。當靶核酸是mRNA時,則要求整個免疫組織化學染色過程必須在無RNA酶的條件下進行。