(一)基本原理

    根據HLA核苷酸堿基序列的多態性和已知的DNA序列，設計一系列等位基因型別特異性順序引物。引物的3'-端堿基根據多態性序列與其嚴格互補。因此，每一型別都具有特定的引物對相對應。通過特定的PCR反應體系擴增各等位基因的型別特異性DNA片段，產生相對應的特異性擴增產物條帶。如果是純合子，產生一條與特異性引物相對應的擴增帶；如果是雜合子則產生兩條與特異性引物對應的擴增帶。其特異性可到分辨出一個堿基的差異。擴增產物僅需借助常規的瓊脂糖凝膠電泳，即可根據是否存在特異性產物的電泳條帶直接進行HLA基因分型。抗原

(二)方法

1．PCR-限制性片段長度多態性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)這是首先建立的對多態性進行檢測的DNA分析技術。個體間抗原特異性來自氨基酸順序的差別，后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性內切酶識別位置及酶切位點數目的不同，從而產生數量和長度不一的DNA酶切片段。用特異性探針對整個基因組DNA酶切片段進行雜交，即可分析限制性長度片段多態性。該法不需探針，簡單快速，可識別單個堿基不同的序列及2個連鎖的位點。

2．PCR一序列特異性寡核苷酸探針(sequence specific oligonucleotide probes，SSOP)此法用人工合成的HLA型別特異的寡核昔酸序列作為探針，與待檢細胞經PCR擴增的HLA基因片段雜交，從而確定HLA型別，PCR技術可將HLA復合體上基因片段特異性地擴增5～6個數量級；而專門設計的SSOP又能探測出等位基因間1～2個核苷酸的差異，故PCR／SSOP技術具有靈敏度高、特異性強、需樣本量少等優點。

3．PCR等位基因組特異性引物(．sequence specific primer，SSP) 目前常規的HLA—DNA分型技術，包括上述的PCR／RFLP、ECR／SSOP等，zui終均需用標記的特性探針與擴增產物進行雜交，再分析結果。PCR／SSP方法設計出一整套等位基因組特異性引物，借助PCR技術獲得HLA型別特異的擴增產物，可通過電泳直接分析帶型決定HIJA型別，從而大大簡化了實驗步驟。

    由于傳統方法在Ⅱ類抗原分型方面困難較大，故上述幾種基因分析型方法目前主要用于Ⅱ類基因座。此外，目前已建立的HLA-NN分型技術還包括PCR單鏈構象多態性分析(PCR—single strand conformational polymorphism，PCR—SSCP)和PCR異源二聚體電泳多態即PCR指紋圖(PCR finger printing)分析。