五聚體(ProImmune)結合胞內細胞因子染色在國外正在成為很多實驗室的常規實驗。五聚體可用于檢測和分離少至淋巴細胞0.02%的抗原特異性CD8+T細胞群。然而，并不是所有的抗原特異性T細胞都具有功能，功能性細胞的比例因個體和疾病不同而異。可以通過對另外的胞內細胞因子聯合染色來研究抗原特異性T細胞的免疫效應功能。
細胞因子的產生對免疫反應起著重要的作用。細胞因子作用的范例包括干擾素-γ（IFNγ）誘導產生的許多抗病毒蛋白、IL-2誘導產生的T細胞增殖、以及腫瘤壞死因子α（TNFα）對病毒基因表達和復制的抑制。細胞因子不是預先形成的，而是在受到相關刺激時才迅速產生和分泌的。因此，胞內細胞因子的染色依賴于在蛋白轉運抑制劑存在的情況下（以將細胞因子截留在細胞內）對細胞的刺激。
激起細胞因子產生的細胞活化一般會導致T細胞受體的下調。因此，如果需要同時檢測T細胞特異性，則應在細胞活化前進行Pro5R五聚體染色以確保染色水平。在此期間五聚體可能會與T細胞受體一同被內化，但仍可以在透化細胞內檢測到。研究抗原特異性T細胞的效應功能時，先將細胞以五聚體染色，然后再用抗原刺激，隨后用針對細胞外表位（如CD8）的特異性抗體進行染色，zui后再進行膜透化和胞內細胞因子染色。
Pro5R五聚體的胞內細胞因子染色使研究者能夠測定對一個抗原刺激產生功能性應答的抗原特異性CD8+T細胞的比例。這在對特定免疫應答的監測和對不同疾病的反應之基本差異的了解方面都有影響意義。
