硫酸*LISA試劑盒使用步驟

工作液準備

1 硫酸多粘菌素標準品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb

2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用

3 *：用蒸餾水按1:10（1+9）稀釋備用

4 顯色劑：已備用，避免光線直照

5 反應終止液：已備用

樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則會出現結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）

1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液

2強力振蕩3分鐘

3用Whatman 濾紙過濾

4取100μl處理后的樣品，加入400μl*

5取25μl處理后的樣品，加入25μl*于反應孔中（樣本稀釋倍數為2）

硫酸多粘菌素步驟

1 實驗須知

1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（252℃），時間約2小時。回溫室溫（252℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存

注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的度和準確度。

1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存

1.3 請不要改變分析程序

1.4 請使用的微量移液器

1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序

1.6 ELISA結果的可重復性*程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作

1.7 為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣

1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面

2 分析步驟

2.1 預*行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，*進行雙孔檢測

2.2 取所需數量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

2.3 樣品稀釋液（10）、濃縮洗滌液（20）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）

2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標準品溶液

2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液

2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液

2.7 在所有孔中加入50μl的抗硫酸多粘菌素抗體酶結合物

2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。

3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）

甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。

4 反應

4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A，再加 50μ顯色液B；輕微晃動反應板使之*混勻

4.2 37℃溫浴10min

4.3 每孔中加入50μl終止液，混勻

4.4 在450nm下檢測吸光度，結果在5min內讀取。