人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書

人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

檢測范圍：0.5μg/L→15μg/L

規(guī)格：96T/盒

用途：用于人組織及相關(guān)液體樣本中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的測定。

工作原理

本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的水平。向預(yù)先包被了人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF），溫育；洗滌后，加入HRP標(biāo)記過的腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）抗體。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的濃度呈正相關(guān)。

組成 

1 標(biāo)準(zhǔn)品（24μg/L） 0.5ml 7 顯色劑A液 6ml

2 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 3ml 8 顯色劑B液 6ml

3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 終止液 6ml

4 酶標(biāo)試劑 6ml 10 說明書 1份

5 30倍濃縮洗滌液 20ml 11 封板膜 2張

6 樣品稀釋液 6ml 12 密封袋 1個

需要而未提供的試劑和器材

1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2.7℃恒溫箱

3.一次性試管

4.吸水紙

5.精密移液器及一次性吸頭

6.蒸餾水

注意事項:

從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再按說明書操作進(jìn)行測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

洗板方法

1.自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

2.手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

標(biāo)本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作程序

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：

2.12μg/L （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3.6μg/L （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

4.3μg/L （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5.1.5μg/L （2號標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6.0.75μg/L （1號標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

7.分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。輕輕晃動混勻，37℃溫育30分鐘。 

8.棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。

9.每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育30分鐘。 

10.棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。

11.每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。

12.取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

操作程序總結(jié)：

1.準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

2.加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘

3.洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘

4.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色10分鐘

5.加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值,計算

保存:2-8℃ 

有效期:6個月。