SD大鼠神經(jīng)視網(wǎng)膜組織分離和鑒定

時(shí)間：2013-9-5閱讀：1675

實(shí)驗(yàn)試劑

1%戊*鈉，液氮，HE染色劑，4%多聚甲醛，二甲苯，蘇木素-伊紅，2.5%戊二醛，0.1mol/L磷酸緩沖液，1%餓酸，丙酮，環(huán)氧樹脂618，醋酸鈾，枸椽酸鉛

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

解剖顯微鏡，凍存管，光鏡，LKB超薄切片機(jī)，透射電鏡（transmission electron- microscope，TEM）

實(shí)驗(yàn)材料

成年雄性SD大鼠

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 成年雄性SD大鼠50只，體重300 g左右。1%戊*鈉30 mg/kg，腹腔注射，頸推脫臼處死。

2. 摘除眼球，分離神經(jīng)視網(wǎng)膜組織。

3. 解剖顯微鏡下沿角膜緣切開眼球，去除角膜、晶體和玻璃體，剝離神經(jīng)視網(wǎng)膜組織，用預(yù)冷去離子水沖洗，濾紙吸干水分。置凍存管內(nèi)，用做組織總蛋白提取。

4. 部分分離的神經(jīng)視網(wǎng)膜組織，立即液氮凍存。7 um快速冰凍切片，HE染色，封片鏡檢。

5. 部分神經(jīng)視網(wǎng)膜組織，立即用4%多聚甲醛固定24小時(shí)，常規(guī)石蠟包埋，4um連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，蘇木素-伊紅染色，常規(guī)脫水，透明，封片，光鏡觀察。

6. 部分神經(jīng)視網(wǎng)膜組織，立即用2.5%戊二醛4℃固定2小時(shí)，0.1mol/L磷酸緩沖液沖洗，1%餓酸后固定2小時(shí)，丙酮梯度脫水，環(huán)氧樹脂618包埋，LKB超薄切片機(jī)切片，電子染色、醋酸鈾、枸椽酸鉛各15 min。透射電鏡（transmission electron- microscope，TEM）觀察攝片。

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