實(shí)驗(yàn)的過(guò)程需要注意，但是前期的準(zhǔn)備更是馬虎不得。有位客戶因?yàn)闇?zhǔn)備問(wèn)題的不*了解而來(lái)電給了我公司王，我們很快解決了問(wèn)題，考慮到一定還有其他朋友想要了解，王要將此發(fā)布出來(lái)分享給熱愛(ài)elisa實(shí)驗(yàn)的朋友們。
    1、不管是試劑盒，還是其它產(chǎn)品，在使用之前我們都要仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。
    2、同樣的，一定要確定試劑盒是不是在有效期內(nèi)。
    3、按說(shuō)明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)。
    4、標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存。
5、準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等。
    6、根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
    7、按說(shuō)明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑，DIY夾心法ELISA常見(jiàn)技術(shù)指南。
    8、選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì)；若選擇兩個(gè)單抗，必須識(shí)別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對(duì)。
    9、ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測(cè)抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
    10、標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說(shuō)明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
    11、一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的elisa操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
    12、為了優(yōu)化靈敏度，建議過(guò)夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
    13、若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。
    14、當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
上海滬宇公司每周都會(huì)有實(shí)驗(yàn)知識(shí)以及動(dòng)態(tài)等等，本周主題討論在elisa實(shí)驗(yàn)之前需要做好哪些準(zhǔn)備工作，如果您還有什么不懂的或者需要了解其它技術(shù)、產(chǎn)品信息都可以我公司王。