基本原理
Na251CrO4能進(jìn)入到增殖的細(xì)胞內(nèi)，與細(xì)胞漿蛋白質(zhì)牢固地結(jié)合。當(dāng)標(biāo)記的51Cr細(xì)胞受到損傷或死亡之后，即可釋放出51Cr。51Cr輻射γ射線，通過測(cè)定受損傷或死亡靶細(xì)胞釋放到上清中的51Cr，即可計(jì)算出NK細(xì)胞活性。
試劑及材料
1. 鉻酸鈉（Na251CrO4）：51Cr的物理半壽期為27.72d。
2. 十二烷基硫酸鈉（SDS）：用無菌生理鹽水配制成2%濃度。
3. 靶細(xì)胞：檢測(cè)人的NK細(xì)胞活性常用的靶細(xì)胞為體外傳代細(xì)胞株K562。檢測(cè)小鼠NK細(xì)胞活性常用的靶細(xì)胞是YAC-1細(xì)胞株。實(shí)驗(yàn)時(shí)一般采用24～48h培養(yǎng)的靶細(xì)胞。
4. 效應(yīng)細(xì)胞：從人外周血（肝素抗凝）分離的單個(gè)核細(xì)胞或小鼠脾細(xì)胞。
5. 含15%NCS的RPMI-1640營(yíng)養(yǎng)液及淋巴細(xì)胞分層液等。
操作方法
1. 靶細(xì)胞的制備：取培養(yǎng)24～48h的靶細(xì)胞2×106/0.5ml，加入100～200μci51Cr，置37℃水浴90min，每間隔15min振搖一次。然后用含5%NCS的RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌三次，除去游離的51Cr。計(jì)數(shù)活細(xì)胞，用*RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至1×105/ml，如暫時(shí)不用，可放置4℃冰箱內(nèi)保存。同時(shí)應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞的51Cr標(biāo)記率，一般要求標(biāo)記率>0.1cpm/細(xì)胞；
2. 效應(yīng)細(xì)胞的制備：常規(guī)方法分離PBMC或小鼠脾細(xì)胞，用*RPMI-1640培養(yǎng)液配制成1×107/ml的細(xì)胞懸液備用；
3. 效―靶細(xì)胞作用：在無菌操作條件下，取效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞各0.1ml（E/T=100:1），加入96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每份標(biāo)本做3復(fù)孔。同時(shí)設(shè)自然釋放對(duì)照孔（0.1ml靶細(xì)胞+0.1ml*RPMI-1640培養(yǎng)液）和zui大釋放孔（0.1ml 靶細(xì)胞+0.1ml 2%SDS），放置37℃、5%CO2溫箱內(nèi)孵育4h，取出后用微量移液器吸出各孔上清0.1ml，加于小塑料試管內(nèi)（勿將細(xì)胞吸出），用γ計(jì)數(shù)儀測(cè)量cpm值；
4. 結(jié)果計(jì)算:根據(jù)下式計(jì)算51Cr自然釋放率和NK細(xì)胞活性:
自然釋放對(duì)照孔cpm均值
zui大釋放對(duì)照孔cpm均值
試驗(yàn)孔cpm均值-自然釋放對(duì)照孔cpm均值
zui大釋放對(duì)照孔cpm均值
注：一般要求51Cr自然釋放率<10％
