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上海滬宇生物科技有限公司

TRIzol影響實驗結果?miRNA文章被撤回

時間:2012-11-19閱讀:197
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    研究小組近日撤回了一篇關于microRNA(miRNA)衰減的文章,因為她們發現,所用的TRIzol試劑會對富含GC的miRNA或具二級結構的miRNA產生不同影響。 研究人員發現,一旦細胞粘附性喪失,某些miRNA迅速降解。當他們以低密度培養細胞或用*或EGTA解離細胞時,細胞內成熟miR-141表達水平顯著下降,而來自同一個轉錄本(pri-miR-200c~141)的miR-200c不受影響。當細胞解離時,*對轉錄的阻斷導致miR-141的迅速耗盡,半衰期不到1小時,從而表明miR-141是通過高速衰減而導致表達水平發生迅速改變的。在進一步的研究中,研究人員通過其他的miRNA包括miR-200a, miR-34a, miR-29b, miR-301a, 和 miR-21再次驗證了這一調控機制.然而,Narry Kim研究小組近日撤回了該文章。她們在撤回聲明中寫道:“基于我們的結果,我們認為,一些miRNA會根據細胞的粘附狀態而選擇性喪失穩定性。然而,在后續研究中,我們發現,低GC含量的miRNA(如miR-141、miR-29b、miR-21、miR-106b、miR-1和miR-34a)會在樣品制備階段選擇性丟失,而不是在細胞中降解。”

    此外,Kim及她的同事還發表了新的數據,將TRIzol RNA分離方法與另一種不太常用的mirVana方法進行了比較,應用在高密度和低密度細胞樣品上。利用TRIzol,她們發現,低密度培養物中的miR-141水平低于高密度培養物。然而,利用mirVana方法,兩者只有輕微的差異。作者認為,兩個操作步驟的數據不一致提出了一個嚴重的問題,即某些miRNA可能在RNA制備過程中丟失,這取決于選擇的操作步驟。 Kim談道:“科學家不可避免地會承認一些假設,而它們后來被證明是錯誤的。我們也存在一些技術限制,而在研究的時候未被發現。因此,得出錯誤的結論有時是不可避免的。zui重要的是要誠實,一旦我們意識到,就要糾正錯誤。”

    對于miRNA的分離,很多實驗室都是使用TRIzol試劑。但從這篇文章的結論來看,TRIzol很可能會影響部分實驗結果。吸取Narry Kim的教訓,大家還是采用兩種分離方法,來驗證結果的可靠性。同時,希望Life Tech的研發部門好好研究一下,發布更為可靠的操作步驟。

 

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