大鼠總?cè)饧紫僭彼幔═T3)ELISA試劑盒體液(常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等)的處理方式
1、血液包括血漿和血清,它們的主要區(qū)別就是:血清凝血而血漿不凝血,所以它們的處理方式也就不一樣
1.1、采集血漿時一般不加抗凝劑(主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽),采集后立即離心800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />1.2、如要采集血清,一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室溫或4℃靜置半小時后,800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />2、胃液和唾液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般飯后半小時內(nèi)不易采集,因為剛進(jìn)食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶,的采集的時間時空腹采集;
3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的,即現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般隔夜尿不采集;
4、組織提取液如肺泡灌洗液等,采集后離心分離,800-1000rmp x 5min,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
大鼠總?cè)饧紫僭彼幔═T3)ELISA試劑盒實驗操作注意事項:
1.試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大,否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間,從而影響實驗的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性;一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器。
3.孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育,嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進(jìn)行。
4.洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
6.建議實驗前預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
7.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個標(biāo)本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商,如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
大鼠總?cè)饧紫僭彼幔═T3)ELISA試劑盒洗板方法:
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
S9混合液配置:
26-510.039A 磷酸鈉緩沖液; 0.1 M, pH 7.4 100毫升/瓶 MOLTOX
26-510.047A 磷酸鈉緩沖液; 0.1 M, pH 7.4 500毫升/瓶 MOLTOX
26-511 6-磷酸葡萄糖(G-6-P); 1.0 M 2毫升/瓶 MOLTOX
60-200.15 NADPH Regensys™ 試劑A 15毫升/瓶 MOLTOX
60-200.4 NADPH Regensys™ 試劑A 40毫升/瓶 MOLTOX
60-200.5 NADPH Regensys™ 試劑A 50毫升/瓶 MOLTOX
60-201.15L NADPH Regensys™ 試劑B 46毫克/瓶 MOLTOX
60-201.4L NADPH Regensys™ 試劑B 123毫克/瓶 MOLTOX
60-201.5L NADPH Regensys™ 試劑B 153毫克/瓶 MOLTOX
60-202 輔酶II 10克/瓶 MOLTOX
表型確認(rèn)培養(yǎng)基:
21-199 EC TRI PC VBE 5/sleeve 5個/包 MOLTOX
21-200 ST QUAD PC Plates 5/sleeve 5個/包 MOLTOX
21-201 Ampicillin Masters 5/sleeve 30毫升/平皿,5平皿/包 MOLTOX
21-202 Tetracycline Masters 5/sleeve 20毫升/平皿,5平皿/包 MOLTOX
21-203 His/Bio Master 30毫升/平皿,10平皿/包 MOLTOX