5-Fluoroorotic Acid (5-FOA) 5-氟乳清酸

搜索關(guān)鍵詞：

5-FOA 5-氟乳清酸；URA3基因； Orotine-5'-monophosphate (OMP) decarboxylase；Counter-selection agent 反向篩選劑；CAS：220141-70-8；

產(chǎn)品描述：

5-氟乳清酸（5-Fluoroorotic Acid，5-FOA）用于酵母反選是一種常用的分子遺傳篩選方法。酵母菌質(zhì)粒清除、質(zhì)粒穿梭、等位置換和雙雜交篩選都會用到5-FOA。5-FOA自身對酵母細胞無毒，但功能型URA3基因能編碼表達乳清酸核苷-5′-單磷酸脫羧酶（OMP脫羧酶），將其轉(zhuǎn)化為有毒形式（如5-氟尿嘧啶），從而使得酵母細胞無法生長。因此，在添加尿嘧啶的5-FOA培養(yǎng)基中，攜帶URA3突變基因的酵母菌能正常生長。5-FOA主要用于釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae（URA3）的鑒定和篩選，雖然曾用于其他菌株，包括粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe（URA4 and URA5），白色念珠菌Candida albicans（URA3）和大腸桿菌E. coli （pyrF）。酵母雙雜交系統(tǒng)中5-FOA的使用允許構(gòu)建激活結(jié)構(gòu)域雜交文庫來鑒定蛋白-蛋白相互作用。

產(chǎn)品應(yīng)用：

1. 檢測酵母URA3基因表達；

2. 構(gòu)建酵母雙雜交文庫；

3. 其他酵母遺傳學(xué)領(lǐng)域包括基因替換，可移動遺傳因子分析和基因突變鑒定研究。

重要參數(shù)

1. CAS NO：703-95-7, 220141-70-8, 207291-81-4

2. 同義名：5-fluoro-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid; 5-Fluorouracil-4-carboxylic acid; 5-Fluoro orotic acid; 2,6-Dihydroxy-5-fluoropyrimidine-4-carboxylic acid;

3. 純度：≥98%

4. 外觀：類白色至淡黃色粉末

5. 熔點：~258°C（高溫非常穩(wěn)定，如煮沸和高壓滅菌）

6. 溶解性：溶于DMSO，微溶于水，乙醇，甲醇

使用方法【詳見懋康整理內(nèi)容】

一、5-FOA培養(yǎng)基配置方法（以粉末形式）

二、5-FOA培養(yǎng)基配置方法（以儲存液形式）

常見問題（FAQs）：

Q1. 如何保存5-FOA？

A1. 5-FOA粉末可置于4°C 短期保存，-20°C長期保存。根據(jù)產(chǎn)品特性溶解配置儲存液，需避光置于4°C 短期保存。小量分裝后-20°C長期保存，可穩(wěn)定保存6個月。

Q2. 5-FOA選擇性培養(yǎng)基pH是多少？

A2.大于pH 4.5條件下5-FOA選擇性被破壞，*的問題在于質(zhì)子化形式的FOA會滲透進入細胞。一般情況標準配方配置的平板pH=2.8。在pH=6或6.2時5-FOA*無活性，pH =5.4時5-FOA活性很好，pH=4或更低時5-FOA活性達到100%。正常情況配置5-FOA培養(yǎng)基不用調(diào)pH。

Q3. 預(yù)制的5-FOA選擇性平板能保存多久？

A3. 絕大多數(shù)實驗室保存5-FOA預(yù)制平板數(shù)月（3-6個月）。有的實驗室數(shù)據(jù)顯示能放9個月和＞12個月（4°C存放），圈上封口膜防止干燥。

Q4. 5-FOA使用濃度？

A4. FOA（1mg/ml）在酵母分子遺傳學(xué)中常用作選擇性試劑；在Ura⁺細胞群體重篩選出Ura^-細胞；篩選釀酒酵母菌乳清酸核苷-5′-單磷酸脫羧酶（OMP脫羧酶）突變株。FOA（0.1mg/ml）用來正篩選尿嘧啶營養(yǎng)缺陷型的硫依賴型嗜熱古細菌（Sulfolobus acidocaldarius）。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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5-Fluoroorotic Acid (5-FOA) 5-氟乳清酸一水合物 克隆與表達分析

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