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更新時(shí)間:2017-11-13 14:01:48瀏覽次數(shù):98次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 環(huán)保在線“Anti-SCG3抗體,分泌粒蛋白3抗體"抗體規(guī)格0.1ml、0.2ml、1ml,抗體產(chǎn)品有效期一年,質(zhì)保三個(gè)月,質(zhì)保期內(nèi)出現(xiàn)任何質(zhì)量問(wèn)題或是出不了實(shí)驗(yàn)結(jié)果均可免費(fèi)退換:
上海研盟生物科技有限公司Anti-SCG3抗體,分泌粒蛋白3抗體*,主要應(yīng)用于WB、IHC、IF、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)中。說(shuō)明書(shū)隨貨發(fā)送,您也可以直接我司在線客服索取。客服
【中文名稱】:分泌粒蛋白3抗體
【英文名稱】:Anti-SCG3
【產(chǎn)品編號(hào)】:BYK-1888R
【規(guī) 格】:0.1ml/0.2ml
【相關(guān)標(biāo)記】:Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 647、AP、APC、Biotin、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、FITC、Gold、HRP、PE、PE-Cy3、PE-CY5、PE-CY5.5、PE-CY7、RBITC.
【濃 度】:1mg/1ml
【抗體來(lái)源】:Rabbit or Mouse or Goat
【克隆類型】:polyclonal or monoclonal
【產(chǎn)品類型】:一抗
【產(chǎn)品應(yīng)用】:可以用于做石蠟切片免疫組化,冰凍切片免疫組化,Elisa,WB,免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)。
Anti-SCG3抗體,分泌粒蛋白3抗體產(chǎn)品介紹:Secretogranin 3 is a member of the chromogranin/secretogranin family of neuroendocrine secretory proteins. Genetic variations in this gene may influence the risk of obesity through possible regulation of hypothalamic neuropeptide secretion.
英文別名:Secretogranin 3; Secretogranin-3; Secretogranin3; SCG3; 1B1075; AI385542; Chgd; Secretogranin III; SGCG; SCG3_HUMAN; SgIII; SGIII.
Western可以參考如下步驟進(jìn)行操作:
1、收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖毫呀赓N壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對(duì)于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白,例如細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等,可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白,也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提。
收集完蛋白樣品后,為確保每個(gè)蛋白樣品的上樣量*,需要測(cè)定每個(gè)蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同,需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y(cè)定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y(cè)定方法對(duì)于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。
2、電泳(Electrophoresis)
(1)、SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻(xiàn)資料進(jìn)行配制,也可以使用博研生物生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。
(2)、樣品處理
在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積,在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻(xiàn)資料配制,也可以使用我公司生產(chǎn)的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 。100℃或沸水浴加熱3-5分鐘,以充分變性蛋白。
(3)、上樣與電泳
冷卻到室溫后,把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果,以及判斷蛋白分子量大小,使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)。
電泳時(shí)通常*在上層膠時(shí)使用低電壓恒壓電泳,而在溴酚藍(lán)進(jìn)入下層膠時(shí)使用高電壓恒壓電泳。對(duì)于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類似電泳裝置,低電壓可以設(shè)置在80-100V,高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。為了電泳方便起見(jiàn),也可以采用整個(gè)SDS-PAGE過(guò)程恒壓的方式,通常把電壓設(shè)置在100V,然后設(shè)定定時(shí)時(shí)間為90-120分鐘。設(shè)置定時(shí)可以避免經(jīng)常發(fā)生的電泳過(guò)頭。
通常電泳時(shí)溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳,或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況,預(yù)計(jì)目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。
3、轉(zhuǎn)膜(Transfer)
我們*在Western實(shí)驗(yàn)中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜(二氟化樹(shù)脂膜膜孔徑:0.45um)也可以使用,但硝酸纖維素膜比較脆,在操作過(guò)程中特別是用鑷子夾取等過(guò)程中容易裂開(kāi)。膜的使用請(qǐng)參考生產(chǎn)商的*使用步驟。
通常如果使用Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)濕式轉(zhuǎn)膜裝置,可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電壓120V,轉(zhuǎn)膜時(shí)間為30-60分鐘。具體的轉(zhuǎn)膜時(shí)間要根據(jù)目的蛋白的大小而定,目的蛋白的分子量越大,需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越長(zhǎng),目的蛋白的分子量越小,需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越短。
在轉(zhuǎn)膜過(guò)程中,特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時(shí),通常會(huì)有非常嚴(yán)重的發(fā)熱現(xiàn)象,把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜的效果可以觀察所使用的預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn),通常分子量zui大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液對(duì)膜進(jìn)行染色,以觀察實(shí)際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍(lán)快速染色液對(duì)完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進(jìn)行染色,以觀察蛋白的殘留情況。
4、封閉(Blocking)
轉(zhuǎn)膜完畢后,立即把蛋白膜放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的Western洗滌液中,漂洗1-2分鐘,以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。從轉(zhuǎn)膜完畢后所有的步驟,一定要注意膜的保濕,避免膜的干燥,否則極易產(chǎn)生較高的背景。
用微型臺(tái)式真空泵吸盡洗滌液,加入Western封閉液,在搖床上緩慢搖動(dòng),室溫封閉60分鐘。對(duì)于一些背景較高的抗體,可以在4℃ 封閉過(guò)夜。
5、一抗孵育(Primary antibody incubation)
參考一抗的說(shuō)明書(shū),按照適當(dāng)比例用Western一抗稀釋液稀釋一抗。
用微型臺(tái)式真空泵吸盡封閉液,立即加入稀釋好的一抗,室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)孵育一小時(shí)。如果一抗孵育一小時(shí)效果不佳,可以在4℃緩慢搖動(dòng)孵育過(guò)夜?;厥找豢?。加入Western洗滌液,在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后,再加入洗滌液,洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。
6、二抗孵育(Secondary antibody inucubation)
參考二抗的說(shuō)明書(shū),按照適當(dāng)比例用Western二抗稀釋液稀釋辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗。
用微型臺(tái)式真空泵吸盡洗滌液,立即加入稀釋好的二抗,室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)孵育一小時(shí)?;厥斩?,加入Western洗滌液,在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后,再加入洗滌液,洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。
7、蛋白檢測(cè)(Detection of proteins)
參考相關(guān)說(shuō)明書(shū),使用BeyoECL, Western 熒光檢測(cè)試劑等ECL類試劑來(lái)檢測(cè)蛋白。
洗片時(shí)可以使用X光片自動(dòng)洗片機(jī)。如果沒(méi)有自動(dòng)洗片機(jī),可以用顯影定影試劑盒自行配制顯影液和定影液進(jìn)行手工洗片。
8、膜的重復(fù)利用(Membrane recovery)
如果蛋白樣品非常寶貴,可以使用Western一抗二抗去除液處理蛋白膜,以重復(fù)利用蛋白膜。
相關(guān)優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品:
PCNA (Proliferation Cell Nuclear gen)origin:human, mouse, rat, rabbit, hoBYKe, bovine, dog, chicken and sheep 增殖細(xì)胞核抗原抗體
PCNA(Proliferation Cell Nuclear gen) 增殖細(xì)胞核抗原抗體
PDCD4(programmed cell death 4) 凋亡相關(guān)蛋白4抗體
PCNA(Proliferation Cell Nuclear gen) 增殖細(xì)胞核抗原抗體
TFAR19/PDCD5(TF-1 cell apoptsis-related gene 19) 凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗體
PCNA(Proliferation Cell Nuclear gen)human,rat,mouse,rabbit,bovine,dog and chicken 增殖細(xì)胞核抗原抗體
PCX/PODXL(Podocalyxin) 足細(xì)胞特異蛋白抗體
PDE4D(phosphodiesterase 4D) 磷酸二酯酶4D抗體
PD-1/CD279(programmed death 1) 程序性死亡1抗體
PDEF(Prostate derived Ets Factor) 上皮特異性ETs轉(zhuǎn)錄因子抗體
PDGF-A 血小板源性生長(zhǎng)因子-A抗體
PDGF-B 血小板源性生長(zhǎng)因子-B抗體
PDGF-BB(plaet derived growth factor-BB) 血小板源性生長(zhǎng)因子-BB抗體
PDGF-R-A 血小板源性生長(zhǎng)因子受體-A抗體
PDGF-R-B 血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體
PDI(Protein Disulfide lsomerase) 蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體
Pdk4(pyruvate deYMdrogenase kinase isozyme 4) 丙酮酸脫氫酶激酶4抗體
PDX1(pancreatic and duodenal homeobox 1) 胰十二指腸同源異型盒基因抗體
PEA3(polymoma virus enhancer 3) 多瘤促活化因子抗體
PEDF (pigment epithelium-derived factor) 色素上皮源性因子抗體
PEG10(Paternally expressed gene 10) 肝癌高表達(dá)基因抗體
PEG3(Paternally Expressed Gene 3) PEG3蛋白抗體
PENK/Enkephalin A(Preproencephalin A) 腦啡肽抗體
PEPT1 (Peptide-transporteBYK 1) 腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體
PEPT2 (Peptide-transporteBYK 2) 腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體
peripherin 外周蛋白抗體
PERK(PRKR-like endoplasmic reticulum kinase) 蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體
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