很多的科研的同學需要做增殖細胞增殖相關(guān)實驗，而且想讓自己的實驗比較有說服力，不少童鞋都是有請教大神做哪種實驗的好，是CCK-8、WST-1、MTT法、XTT法哪種實驗比較有說服力？這時候問題就來了為什么將Cell Counting Kit (CCK-8)作為細胞增殖與毒性檢測佳選擇？看過來人的經(jīng)驗之談。
Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），適用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
CCK-8檢測試劑盒-實驗原理：
WST-8屬于MTT的升級產(chǎn)品，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細胞數(shù)量。
為什么將Cell Counting Kit (CCK-8) 作為細胞增殖與毒性檢測佳選擇：
如下表，CCK-8法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優(yōu)勢比較，結(jié)果不言而喻！
| 檢測方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
| 甲臜產(chǎn)物的水溶性 | 差（需加有機溶劑溶解后再檢測） | 好 | 好 | 好 |
| 產(chǎn)品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
| 使用方法 | 配成溶液后使用 | 現(xiàn)配現(xiàn)用 | 即開即用 | 即開即用 |
| 檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
| 檢測時間 | 較長 | 較短 | 較短 | zui短 |
| 檢測波長 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
| 細胞毒性 | 高，細胞形態(tài)*消失 | 很低，細胞形態(tài)不變 | 很低，細胞形態(tài)不變 | 很低，細胞形態(tài)不變 |
| 試劑穩(wěn)定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
| 批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
| 便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
* 細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀數(shù)從而找到佳測定時間
* 酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾（扣除空白孔即可）
| 產(chǎn)品名稱及描述 | 貨號 | 產(chǎn)品說明 |
| Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | KTC011001 | 詳情 |
CCK-8法細胞增殖-毒性檢測
1、在96孔板中配置100 μl 的細胞懸液（2000-5000 cells）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時（37℃，5% CO2）。
2、向培養(yǎng)板加入10 μl 不同濃度的待測物質(zhì)。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。
4、向每孔加入10 μl CCK-8溶液（不要讓孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
6、用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。
注：若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
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