大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1elisa試劑盒操作程序：

1．將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2．按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷凍。

3．加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50 μL /孔，然后加入抗體工作液50 μL /孔，再振蕩混勻，用封板膜蓋板，37 ℃反應(yīng)30 min。

4．洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。

5．加入酶標(biāo)記物100 μL /孔，用封板膜蓋板，37 ℃反應(yīng)20 min。

6．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。

7．顯色：每孔加入底物緩沖液50 μL，再加底物液50 μL，輕輕振蕩混勻，37 ℃環(huán)境避光顯色10 min。

8．測定：每孔加入終止液50 μL，輕輕振蕩勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450 nm處（在20 min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值。

大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1elisa試劑盒檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件：

1. 加樣后及時(shí)放人孵箱，標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

2. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。

3. 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

4. 合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。

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