應用EXCEL繪制ELISA標準曲線及計算樣品濃度

 在ELISA實驗結束后，我們得到的是經酶標儀得出的標準品以及樣本的OD值。其中，標準品的濃度已知，我們可以利用標準品的OD值及其相對應的濃度，以OD值為橫坐標，濃度為縱坐標，做一條標準曲線，并用公式表示出來。這樣，我們把樣本的OD值以X值代入，便可求出Y值，即樣本濃度。          

 下面我們就一步步來實現這個目標：

1、首先，將數據整理好輸入Excel，分別為經酶標儀讀出標準品的OD值及其對應的濃度值。  

           2、拖動鼠標選取完成的數據區，并點擊圖表向導，在圖表類型中選“XY散點圖”，并選擇子圖表類型的“散點圖”（*個沒有連線的），如下圖所示。

          3、點擊“下一步”，出現如下圖界面。如是輸入是如本例橫向列表的就不用更改，如果是縱向列表就改選“列”。

          在做ELISA標準曲線，并通過此曲線求樣本濃度時，因樣本OD值是已知的，因此我們需要將OD值設為X。根據上圖我們可以看到，橫坐標X值為OD值，縱坐標Y為標準品濃度，這正是我們想要的。

          有時需要我們手動選擇X值，這時可以點擊“系列”來更改，如下圖。

         如果要對橫坐標和縱坐標進行調換，我們可以就點擊X值和Y值文本框右邊的小圖標，結果如下圖：

          出現上圖后，拖動鼠標選取正確的數據區域以調整X或Y。

          5、調好之后，然后點擊“下一步”出現圖標選項界面，如下圖。

         6、點擊“下一步”，在彈出的窗口再點擊“完成”，現在一張帶標準值的完整散點圖就已經完成，如下圖。

          7、到了這一步，散點圖便完成了。我們可能會問，曲線在哪里啊？

其實很簡單，先點擊圖上的標準值點（記住一定要點選上），然后單擊右鍵，點擊“添加趨勢線”。彈出趨勢線類型選擇對話框，有線性，對數，多項等選項，如下圖：

           8、在選擇之前，我們先對上圖做一下肉眼觀察，如果那些點能連成一條直線，或接近直線，我們就選擇“線性”，意思就是出來的趨勢線是一條直線，相應的該直線的方程就是y=ax
+b的形式。不過一般的ELISA都不會是所有的標準點呈*的線性關系的，也就是說不是一條*的直線，這時我們可以選擇“多項式”，多項式后面還有“階數”的選擇，也就是說求出來的方程是幾次方，我們一般選“2階”，即出來的方程為y=ax²+bx+c. 選擇完畢后，彈出以下窗口。

          9、趨勢線也就是標準曲線在此便顯示出來了。接下來我們需要將公式顯示出來，以根據樣本的OD值計算其濃度值。在鼠標點選該線（一定要選中，選中后出現下圖的樣子即線由很多店標識出來），單擊鼠標右鍵，選擇趨勢線格式。我們在彈出的窗口中選擇“選項”選項卡，出現下圖，我們選擇顯示公式，顯示R方，即相關系數，這時公式與R方值便都顯示出來了。

我們將樣本的OD值作為X代入上述方程，求出來的便為濃度值了。

一般ELISA的標準曲線的相關系數要達到0.95以上，本例中為0.9999，非常不錯的曲線，這樣就保證了由該曲線及其方程求出的樣本濃度具有很強的可信性。