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酶聯免疫吸附(ELISA)實驗

閱讀:429發布時間:2017-5-3

酶聯免疫吸附(ELISA)實驗

實驗目的

   酶聯免疫吸附測定(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA)是在免疫酶技術(immunoenzymatic techniques)的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術,ELISA過程包括抗原(抗體)吸附在固相載體上稱為包被,加待測抗體(抗原),再加相應酶標記抗體(抗原),生成抗原(抗體)——待測抗體(抗原)——酶標記抗體的復合物,再與該酶的底物反應生成有色產物。借助分光光度計的光吸收計算抗體(抗原)的量,待測抗體(抗原)的定量與有色產生成正比。

   實驗原理

   (1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫徐活性;

   (2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物,而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性;

   (3)酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺與標本中相應抗原或抗體的量成正比。因此,可以按底物顯色的程度顯示實驗結果。

   應用:

   ELISA法是免疫診斷中的一項新技術,現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據已經使用的結果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本。因此,也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來檢測抗體,而且可用于測定體液中的循環抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。ELISA法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大,可概括為四個方面:1、免疫酶染色各種細胞內成分的定位。2、研究酶抗體的合成。3、顯現微量的免疫沉淀反應。4、定量檢測體液中抗原或抗體成分。


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