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ELISA實(shí)驗(yàn)誤差如何操作?

閱讀:339發(fā)布時間:2017-8-16

  對于ELISA實(shí)驗(yàn),科研人員zui怕的就是有誤差,我們能做的就是在可控的范圍內(nèi),減少ELISA實(shí)驗(yàn)誤差,才是實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)。在ELISA實(shí)驗(yàn)操作中,誤差有誤差,一個個小小的誤差導(dǎo)致zui終實(shí)驗(yàn)存在*的數(shù)據(jù)差距,那么如何縮小實(shí)驗(yàn)誤差?下面隨著金益柏一起來看看需要注意的:

ELISA實(shí)驗(yàn)成功與否關(guān)鍵在于減少實(shí)驗(yàn)誤差



  1、科研工作者應(yīng)該具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)和操作經(jīng)驗(yàn),對于實(shí)驗(yàn)儀器、器械都很熟悉,而且具備總結(jié)和分析問題的能力,能夠及時處理實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)的意外。


  2、使用校對過的微量移液器,排除因?yàn)樵O(shè)置錯誤導(dǎo)致的誤差。


  3、仔細(xì)閱讀elisa說明書,嚴(yán)格按照說明書來操作,不要混用不同批號的試劑,對于不能確定的,需要反復(fù)實(shí)驗(yàn)并總結(jié)進(jìn)行改進(jìn)。


  4、洗滌*,洗滌不干凈,會導(dǎo)致假陽性,洗滌液也要新鮮,要現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可以出現(xiàn)假陽性。


  5、嚴(yán)格控制反應(yīng)時間,反應(yīng)時間比較長,酶失去活性;反應(yīng)時間短的話,酶結(jié)合物不能和血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物機(jī)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可以造成假陰性。


  6、注意試劑盒的保存期,過期的試劑盒不能使用。


  7、評估試劑的實(shí)用性,試劑是否穩(wěn)定,準(zhǔn)確率高低很重要,在試劑啟用前,應(yīng)該對陰、陽對照品反復(fù)對照實(shí)驗(yàn),判定試劑符合要求后才能使用。


  8、嚴(yán)格掌握顯色時間,顯色時間短的話,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物量過少,容易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應(yīng)判定為假陽性,這可能和試劑有關(guān)系,加顯色后立即顯色,不可報(bào)陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。


  9、加樣需要準(zhǔn)確快速,如果加樣不準(zhǔn)確,酶生成的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。


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