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江蘇菲亞生物科技有限公司
主營產品： 轉化生長因子 elisa試劑盒,植物葉酸 elisa試劑盒,豬藍耳(PRRS)elisa kit |
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成功完成WB檢測，必須滿足的4個條件
2017-3-9 閱讀(974)
免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質印跡（Western blotting），是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。結合化學發光檢測，可以同時比較多個樣品同種蛋白的表達量差異。
成功完成Western Blot檢測，必須滿足4個條件：
1. 凝膠洗脫：轉移期間蛋白質必須從凝膠中洗脫出來，如果蛋白質還截留在凝膠中，將無法在膜上進行分析。
2. 吸附到膜上：在轉移過程中蛋白質必須吸附到膜上，如果蛋白不吸附，將無法在膜上進行分析。
3. 處理期間仍截留在膜上：在轉移后的處理過程中蛋白質必須保持吸附在印跡膜上。處理過程中可接近：被吸附的蛋白質必須能夠與檢測試劑接觸，如果蛋白質被掩蓋則無法檢測。
4. 成功進行WB檢測，則設置合適正確的對照是*的，只要正確設置了這些對照，即可快速和準確的找到WB的問題所在，并保證實驗結果的準確性和特異性！一般需要設置的對照如下：
陽性對照：明確表達檢測蛋白的組織或細胞，用于檢測抗體的工作效率。
陰性對照：明確不表達檢測蛋白組織或細胞，用于檢測抗體的特異性
二抗對照：不加一抗，用于檢測二抗的特異性
內參對照：檢測標本的質量和二抗系統
空白對照：不加一抗和二抗；用于檢測膜的性質和封閉的效果
