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江蘇菲亞生物科技有限公司
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ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想莫慌張
2019-8-15 閱讀(1213)
ELISA實(shí)驗(yàn)中難免會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想也時(shí)有發(fā)生，遇到這樣的事情不要慌張，盡量找出解決問(wèn)題的方法，今天就讓上海勁馬與您一起分享一下有哪些原因會(huì)使ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不理想，和常見(jiàn)的解決方案。
一，生物實(shí)驗(yàn)室的污染
生物實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的廢液污染主要是化學(xué)性污染和生物性污染，另外還有放射性污染。我們經(jīng)常認(rèn)為實(shí)驗(yàn)室中的有機(jī)試劑并不直接參與發(fā)生反應(yīng)，僅僅起溶劑作用，因此就直接把消耗的有機(jī)試劑以各種形式排放到周邊的環(huán)境中，排放總量大致就相當(dāng)于試劑的消耗量，然而日復(fù)一日，年復(fù)一年，這樣累積下來(lái)的排放量就十分可觀了。
二，ELISA試劑盒花板現(xiàn)象
關(guān)于ELISA試劑盒結(jié)果“花板"的問(wèn)題對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)造成了很大影響，往往會(huì)使檢測(cè)者做出誤判，是實(shí)驗(yàn)中必須要注意和避免的。
針對(duì)這種“花板"現(xiàn)象我們通過(guò)多次實(shí)驗(yàn)的分析和判斷，總結(jié)了一些經(jīng)驗(yàn)，分析如下：
1 標(biāo)本、試劑、儀器
1.1 標(biāo)本 出入境人員的血液標(biāo)本。
1.2 試劑 HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA試劑盒。
1.3 儀器 LD4-2型腦心機(jī)BID RAD1575型洗板機(jī)BID RAD550酶標(biāo)儀。
2 方法
所有被檢出入境人員的血液標(biāo)本，按照各個(gè)廠家提供的ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗(yàn)項(xiàng)目操作。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。
3 結(jié)果
所使用不同廠家的試劑有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“花板"問(wèn)題。
4 分析
在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，所用的儀器及加樣過(guò)程都處于正常狀態(tài)的情況下，步驟均按照各種試劑說(shuō)明書(shū)的要求去做，排除實(shí)驗(yàn)所用儀器和操作步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響外，ELISA試劑盒內(nèi)的空白、陰性和陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常，只有檢測(cè)的血液標(biāo)本情況異常。根據(jù)國(guó)家和疾控中心報(bào)告陽(yáng)性率的比例不應(yīng)該是很高的情況下，HBsAg在用ELISA之前都經(jīng)過(guò)了快速金標(biāo)試劑的檢測(cè)，陽(yáng)性標(biāo)本得到了一定的控制。因此，原因可能是在標(biāo)本的處理，特別是放置時(shí)間、離心速度和離心時(shí)間方面的問(wèn)題。所以，標(biāo)本的處理就成為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的主要可疑因素。為了避免“花板"現(xiàn)象的出現(xiàn)，降低檢測(cè)的假陽(yáng)性率，獲取準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便省時(shí)的ELISA試劑。使用ELISA試劑盒對(duì)血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的結(jié)果中，空白和陰性，陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，根據(jù)衛(wèi)生部臨檢中心提供的數(shù)據(jù)，HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常范圍均為2NCU，但血液標(biāo)本孔的OD值比較高（大多數(shù)OD值≥0.070）。標(biāo)本的陽(yáng)性率很高，每板除對(duì)照孔外，有時(shí)陽(yáng)性高達(dá)10孔之多，而大多數(shù)真陽(yáng)性標(biāo)本都出現(xiàn)弱陽(yáng)性結(jié)果。
