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小鼠尼克酰胺-N-甲基轉移酶(NNMT)elisa測定說明書

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小鼠尼克酰胺-N-甲基轉移酶(NNMT)elisa測定試劑盒性能穩定、易保存,操作簡便,2017買試劑送禮品活動進行中,詳詢北京方程生物客服......

詳細介紹

小鼠尼克酰胺-N-甲基轉移酶(NNMT)elisa測定說明書Solute Carrier Family 16, Member 1 (SLC16A1)Human elisa kit 質量問題可包換包退。

小鼠尼克酰胺-N-甲基轉移酶(NNMT)elisa測定說明書產品規格分為96T、48T,提供ELISA實驗代測,如沒有特殊說明,實驗報告將以電子形式發送.結果判斷1、 定性測定定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果,即用滴度來表示反應的強度,其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中,將標本作一系列稀釋后進行試驗,呈陽性反應的zui高稀釋度即為滴度。根據滴度的高低,可以判斷標本反應性的強弱,這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中,陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔。兩類反應的結果判斷方法不同,分述于下。(1) 間接法和夾心法這類反應的定性結果可以用肉眼判斷。目視標本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性。但在ELSIA中,正常人血清反應后常可出現呈色的本底,此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異,因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判斷結果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的指標。目視法簡捷明了,但頗具主觀性。在條件許可下,應該用比色計測定吸光值,這樣可以得到客觀的數據。先讀出標本(sample,S)、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值,然后進行計算。計算方法有多種,大致可分為陽性判定值法和標本與陰性對照比值法兩類。a. 陽性判定值陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個特定的常數,以此作為判斷結果陽性或陰性的標準。用此法判斷結果要求實驗條件十分恒定,試劑的制備必須標準化,陽性和陰性的對照品應符合一定的規格,須配用精密的儀器,并嚴格按規定操作。陽性判定值公式中的常數是在這特定的系統中通過對大量標本的實驗檢測而得到的。現舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血漿,陽性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng/ml.每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先計算陰性對照A值的平均數(NCX)和陽性對照A值的平均數(PCX),兩個平均數的差(P-N)必須大于一個特定的數值(例0.400),試驗才有效。3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而已另兩個陰性對照重新計算NCX如有兩個陰性對照A值超出以上范圍,則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算: 陽性判定值=NCX+0.05 標本A值>陽性判定值的為陽性,小于陽性判定值的為陰性。應注意的是,式中0.05為該試劑盒的常數,只適合于該特定條件下,而不是對各種試劑均可通用。根據以上敘述可以看出,在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質控作用,試劑變質和操作不當均會產生"試驗無效"的后果。b.標本/陰性對照比值在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標本(S)和陰性對照(N)的A值后,計算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(patient)的縮寫,不應誤解。為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽性標準,現多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統應該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應注意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液,以致反應后產生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此,這類試劑盒規,如N<0.05(或其他數值),則按0.05計算,否則將出現假陽性結果。(2)競爭法在競爭法ELISA中,陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結合物的濃度和加入競爭抑制物的量,一般調節陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間,此時反應zui為敏感。 競爭法ELISA不易用自視判斷結果,因肉眼很難辨別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異,一般均用比色計測定,讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種,即陽性判定值法和抑制率法。a. 陽性判定值法與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同,但在計算公式中引入陽性對照A值,現舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復鈣人血漿,陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml.每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先計算陰性對照A值的平均值(NCX)和陽性對照A值的平均數(PCX),兩個平均數的差(N-P)必須大于一個特定的數值(例如0.300),試驗才有效。3個陰性對照A值均應小于2.000,而且應≥0.5×NCX并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而以另2個陰性對照重新計算×NCX如有2個陰性對照A超出以上范圍,則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算:陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX2、定量測定ELISA操作步驟復雜,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的*,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法ELISA,標準曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數紙,以檢測物的濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,*較呈直線的部分是的檢測區域。甲胎蛋白質ELISA測定的標準曲線示例見圖4-1。測定小分子量物質常用競爭法,其標準曲線中吸光度與受檢物質的濃度呈負相關。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標準曲線示例見圖4-2.注意圖中橫坐標為對數關系,這更有利于測定系統的表達。新型酶標儀一般帶有自動軟件可進行定量分析。

 

小鼠尼克酰胺-N-甲基轉移酶(NNMT)elisa測定說明書洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來??梢哉f在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內反應液b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去)c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短d.吸干孔內液體。吸干應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干e.重復操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

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