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小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP3α)elisa測(cè)定

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小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP3α)elisa測(cè)定產(chǎn)品規(guī)格分為96T、48T,提供ELISA實(shí)驗(yàn)代測(cè),如沒(méi)有特殊說(shuō)明,實(shí)驗(yàn)報(bào)告將以電子形式發(fā)送.洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)??梢哉f(shuō)在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過(guò)程如下:(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液b.用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去)c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動(dòng),浸泡時(shí)間不可隨意縮短d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干e.重復(fù)操作c和d,洗滌3-4次(或按說(shuō)明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時(shí),可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡(jiǎn)便、快速。已有實(shí)驗(yàn)表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

 

小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP3α)elisa測(cè)定加樣在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測(cè)定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液過(guò)程迅速完成。

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