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番茄內標準LAT52基因PCR試劑盒常見問題與解決方法

2022-7-5  閱讀(115)

番茄內標準LAT52基因PCR試劑盒常見問題與解決方法:

陽性對照、待測樣本均無條帶。

1)、PCR反應體系或反應條件不合適。

2)、PCR試劑保存不當失去活性。

3)、引物設計問題。

解決方法:

1)使用梯度PCR摸索PCR反應條件。

2)2× PCR Mix應保存于-20℃,使用時避免反復凍融。若使用頻繁,可在4℃短時間存放。

3)嘗試重新設計引物進行檢查。


陽性對照有目的條帶,待測樣本無條帶或條帶弱。

1、不當儲存或長期儲存引起試劑活性喪失。

2、加入組織裂解液過量。

3、樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久,DNA基因組已經降解。

4、模板加入量不適合。

5、PCR循環數不足。

解決方法:

1、使用新鮮的試劑。

2、增大反應體系,或減少裂解液的用量。

3、裂解混合液液可在4℃保存2-3天,盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR。

4、在反應體系10-20%范圍內優化模板加入量。反應效性能較差時,可以降模板濃度調節到低于10%的范圍。

5、適當增加PCR的循環數,推薦在35-40循環為佳。因為模板復雜,一般PCR反應要比用純化的 DNA模板多5-10個循環為佳。




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