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上海莼試生物技術有限公司
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小鼠elisa試劑盒的原料和制備方法
2017-5-25 閱讀(311)
一、固相載體
小鼠elisa試劑盒可作ELISA中載體的物質很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能，抗體或蛋白質抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。在ELISA測定過程中，它作為載體和容器，不參與化學反應。加之它的價格低廉，所以被普遍采用。
ELISA載體的形狀主要有三種：小試管、小珠和微量反應板。小試管的特點是還能兼作反應的容器，zui后放入分光光度計中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球，表面經磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器，在洗滌過程中使圓珠滾動淋洗，效果更好。zui常用的載體為微量反應板，于ELISA測定的產品也稱為ELISA板，通用的標準板形是8×12的96孔式。為便于作少量標本的檢測，有制成8聯或12聯孔條的，放入座架后，大小與標準ELISA板相同。ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測，并可在特定的比色計上迅速讀出結果?，F在已有多種自動化儀器用于微量反應板型的ELISA檢測，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對操作的標準化極為有利。
良好的ELISA板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別，各種產品的質量差異很大。因此每一批號的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。小鼠elisa試劑盒常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔后，每孔內加入適當稀釋的酶標抗人IgG抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應后分別測每孔溶液的吸光度。控制反應條件，使各讀數在0.8左右。計算所有讀數的平均值。所有單個讀數與平均讀數之差應小于10%.
二、抗原和抗體
在ELISA實施過程中，抗原和抗體的質量是實驗是否成功的關鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價高、親和力強。
ELISA所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養物等，一般含有多種抗原成分，需經純化，提取出特定的抗原成分后才可應用，因此也稱提純抗原（purifiedantigen）。重組抗原和多肽抗原均為人工合成品，使用安全，而且純度高，干擾物質少。因此雖然制備合成抗原有較高的技術難度且要求較為昂貴的儀器設備和試劑，其應用仍十分普遍，特別是對那些天然抗原不易得到的試驗，更顯出其獨到之處。
三、免疫吸附劑
固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過程稱為包被（coating）。由于載體的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液（zui常用的為pH9.6的碳酸緩沖液）中，加于ELISA板孔中在4℃過夜，經清洗后即可應用。如果包被液中的蛋白質濃度過低，固相載體表面有能被此蛋白質*覆蓋，其后加入的血清標本和酶結合物中的蛋白質也會部分地吸附于固相載體表面，zui后產生非特異性顯色而導致本底偏高。在這種情況下，如在包被后再用1%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除這種干擾。這一過程稱為封閉（blocking）。包被好的ELISA板在低溫可放置一段時間而不失去其免疫活性醫`學教育網搜集整理。
四、酶和底物
ELISA中所用的酶要求純度高、催化反應的轉化率高、專一性強、性質穩定、來源豐富、價格不貴、制備成的酶標抗體或抗原性質穩定，繼續保留著它的活性部分和催化能力。在受檢標本中不存在與標記酶相同的酶。另外它的相應底物應易于制備和保存，價格低廉，有色產物易于測定，光吸收高。小鼠elisa試劑盒中zui常用的酶為辣根過氧化酶（HRP）和從牛腸粘膜或大腸桿菌提取的堿性磷酸酶。
