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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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NADP磷酸酶（NADPase）測定步驟
2021-7-7 閱讀(436)
NADP磷酸酶（NADPase）測定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至600nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1）試劑四于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）孵育5min。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、200μL試劑四和40μL試劑五，混勻，記錄600nm處20s時(shí)吸光值A(chǔ)1和1min20s后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
NOX 活力單位的計(jì)算
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）NOX活力的計(jì)算:
單位的定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/mL）＝ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T=2500×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NOX活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/g鮮重）=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.01÷T=505×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/104cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T=1.01×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.25mL；V樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，0.202mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。
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