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上海莼試生物技術有限公司
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人Dectin-1蛋白ELISA檢測試劑盒操作步驟
2021-9-28 閱讀(171)
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘。
人乳腺癌細胞；MCF 7B
人急性淋巴母細胞性白血病細胞；MOLT-4
人小細胞肺癌細胞；NCI-H209
黑人Burkitt淋巴瘤細胞；RAJI
人B淋巴細胞瘤細胞；RAMOS
人B淋巴細胞瘤細胞；RAMOS(RA.1)
人腦瘤細胞；SF126
人腦瘤細胞；SF763
人腦瘤細胞；SF767
人皮膚黑色素瘤細胞；SK-MEL-1
人腎上腺皮質癌細胞；SW-13
人結直腸癌細胞；T84
人急性單核細胞白血病細胞；THP-1
人神經膠質細胞瘤細胞；U251
人組織細胞淋巴瘤細胞；U937 [U-937]
人胃腺癌細胞；BGC-823
人低分化肺腺癌細胞；GLC-82 [GLC82]
人喉癌上皮細胞；Hep-2
人纖維肉瘤細胞；HT-1080
人絨癌細胞；JEG-3
人耐VP16絨癌細胞株；JEG-3/VP16
白介素-2轉染耐VP16絨癌細胞；JEG-3/VP16-IL-2
TNFa轉染耐VP16絨癌細胞；JEG-3-VP16-TNFa
人急性T淋巴細胞白血病細胞；Jurkat, Clone E6-1
人神經母細胞瘤細胞；BE(2)-M17
人乳腺癌細胞；MDA-MB-157
人成骨肉瘤細胞；MG-63
人小細胞肺癌細胞；NCI-H446
人多發性骨髓瘤細胞；RPMI-8226 [RPMI8826]
人腦瘤細胞；SF17
人乳腺癌細胞；SK-BR-3
人神經母細胞瘤細胞；SK-N-SH
人肝癌細胞；SMMC-7721
