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上海莼試生物技術有限公司
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鵝同型半ELISA檢測試劑盒?操作步驟
2021-10-19 閱讀(135)
鵝同型半ELISA檢測試劑盒操作步驟:
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘。
MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞
MM, 小鼠小膠質細胞
mCF, 小鼠心臟成纖維細胞
MN-c, 小鼠皮質神經元
細胞名稱
人絨毛膜毛細血管內皮細胞
人羊膜上皮細胞
人絨毛間充質成纖維細胞
人羊膜間充質基質細胞
人絨毛膜間充質基質細胞
細胞名稱
NRK-52E，大鼠腎細胞
H9c2大鼠心肌細胞（ATCC來源）
NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系
大鼠骨髓間充質干細胞（BMSCs）
HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系
CHO, 中國倉鼠卵巢細胞系
COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞
SF9, 昆蟲卵巢細胞
BRL 3A, 大鼠肝正常細胞
HK-2, 人腎皮質近曲小管上皮細胞
HET-1A, 人食管上皮細胞
RGC-5, 小鼠視網膜神經節細胞
GC-1, 鼠精原細胞
293A，人胚腎上皮細胞系（腺病毒包裝級別）
hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞
293T, SV40轉化的人胚腎上皮細胞系
