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上海莼試生物技術有限公司
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單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）試劑盒技術參數
2020-3-13 閱讀(178)
| 提 供 商 | 上海莼試生物技術有限公司 | 資料大小 | 12.3KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 下載次數 | 12次 | |
| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數 | 178次 |
單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）試劑盒說明書
測定意義：
MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無脊椎動物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質代謝，含量較低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纖維化的程度。此外，MAO活性異常導致細胞內單胺類神經遞質運轉出現紊亂，從而引發(fā)多種病癥。
測定原理：
MAO催化單胺類底物脫氨生成相應的醛，進一步氧化成酸；底物在360nm處有特征吸收峰，測定360nm光吸收下降的速率，計算MAO活性。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體60mL×2瓶，4℃保存。
試劑二：液體2mL×1管，4℃避光保存。
粗酶液提取：
稱取約0.1g樣品，加1 mL預冷的提取液一充分冰浴勻漿，1000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉移到另一預冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1mL預冷的提取液二，震蕩混勻，50000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預冷的1mL 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定）。
測定操作表：
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至360nm，對照管調零。
操作表
對照管
測定管
酶液（µL）
20
試劑一（µL）
180
160
試劑二（µL）
20
20
混勻，對照管調零，測定360nm處吸光值A1，然后37℃水浴60min，對照管調零，測定360nm處吸光值A2。ΔA=A1-A2
MAO活性計算公式：
1、按蛋白含量計算
酶活定義：37℃，pH7.6時，每毫克蛋白質1min內轉化1μmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性（U/ mg prot）= ΔA÷1.46÷60×10÷Cpr = ΔA÷8.76÷Cpr
2、按樣本質量計算：
酶活定義：37℃，pH7.6時，每克樣品1min內轉化1μmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性（U/ g）=ΔA÷1.46÷60×10÷W = ΔA÷8.76÷W
Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g。
注意事項：
1、吸光度變化應該控制在0.05～0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數要相應改變。
2、樣品蛋白質含量需要另外測定，可選用考馬斯亮藍法蛋白含量測定試劑盒進行測定。
