維生素 D 基因檢測試劑盒(熒光 PCR 法)說明書
【產品名稱】
通用名稱：維生素 D 基因檢測試劑盒(熒光 PCR 法)
【包裝規格】 48 人份/盒
【預期用途】 本試劑盒用于定性檢測人全血和唾液樣本中 VDR 基因 BsmI 位點、ApaI 位點和 FokI 位點的基
因多態性，進行基因分型。
【檢驗原理】 本試劑盒采用 TaqMan-MGB 探針技術，對維生素 D 的 VDR 基因 3 個多態性位點，設計 3 套特
異性引物和探針組合，在一個反應體系中通過兩種不同通道對檢測一個位點的基因多態性，同時針對β-珠蛋白
基因（HBB）保守區域設計特異性引物和探針作為內參對樣本的采集、DNA 的提取及擴增進行監控。。
【主要組成成分】
序號 | 名稱 | 主要組成成分 | 規格（48 人份/盒） |
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1 | 反應液 A | PCR 緩沖液、BsmI 引物和探針、內標引物和探針 | 1×960μL |
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2 | 反應液 B | PCR 緩沖液、ApaI 引物和探針、內標引物和探針 | 1×960μL |
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3 | 反應液 C | PCR 緩沖液、FokI 引物和探針、內標引物和探針 | 1×960μL |
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4 | 陽性對照 | 質粒混合液 | 1×100μL |
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5 | 陰性對照 | H2O | 1×100μL |
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【儲存條件及有效期】 試劑盒于-20℃±5℃避光貯存，有效期為 12 個月。
【適用儀器】 ABI 7500 熒光定量 PCR 儀。
【樣本要求】 本試劑盒適用于從全血和唾液樣本中提取人類基因組 DNA 進行檢測。
【檢驗方法】
1. PCR 前處理
a) 試劑配制（試劑準備區）
0) 從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫，各組分充分融解，渦旋混勻，瞬時低速離心。
2） 核算當次實驗所需要的反應數（N），按照 20μl/孔的分裝量將 3 種反應液分裝到 N 個 PCR 反應管內。
PCR 反應管通過傳遞窗轉移至樣本處理室，剩余試劑放回-20℃±5℃冰箱避光保存。
N=（樣本數+陰性對照（1T）+陽性對照（1T））×3。
b) 樣本提取（樣本準備區）
參考所購買的商用基因組 DNA 提取試劑盒說明書進行操作。
c) 加樣（樣本準備區）
將待測樣本的基因組 DNA、陰性對照、陽性對照分別加入已裝有 3 種反應液的 PCR 反應管，加入量為 5μl/
孔。
2. PCR 擴增
將準備好的PCR反應板或反應管放置在儀器樣本槽相應位置，并記錄放置順序。按表3設置儀器擴增相關參數：
表3：儀器擴增相關參數
| | | 步驟 | 溫度 | | 時間 | 循環數 |
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| | 1 | 預變性 | 95℃ | | 5 min | 1 cycle |
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| | 2 | 變性 | 95℃ | | 10 s | 40 |
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| | 3 | 退火、延伸及檢測熒光 | 60℃ | | 45 s | cycles |
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| | | 步驟 3 收集熒光信號，檢測通道：FAM、VIC、ROX |
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*注：passive reference 和 quencher處均選擇“none”。 | | |
