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上海邦景實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進口elisa試劑盒，細胞株，細胞系，菌種 |
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- www.bhsy-e.com/
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更新時間：2022-05-30 14:53:52瀏覽次數(shù)：543
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生物醫(yī)學(xué)實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
中文名稱：高純度質(zhì)粒小提試劑盒(1～4mL)
英文名稱：Plasmid Miniprep Kit(1-4mL)
產(chǎn)品規(guī)格：50次
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號：BJ-F0163459
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒通過堿裂解法裂解細胞，新型的硅基質(zhì)膜專一結(jié)合DNA，在特定條件下，有效去除內(nèi)毒素、基因組DNA、RNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。每次可抽提1～4mL菌液，抽提獲得的質(zhì)粒量會受質(zhì)粒拷貝數(shù)，細胞培養(yǎng)濃度等因素影響。由本試劑盒所得的質(zhì)粒可直接用于細胞轉(zhuǎn)染，DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)化細菌，內(nèi)切酶消化等下游實驗。 保存條件： 室溫條件下，可保存12個月，更長時間保存可置于4℃。若溶液產(chǎn)生沉淀，可在室溫下放置一段時間，或在37℃水浴中預(yù)熱10min，以溶解沉淀。 使用建議： 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大10kb的大質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，使用5～10mL過夜培養(yǎng)物，同時按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脫緩沖液EB應(yīng)在65～70℃水浴預(yù)熱，在吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間，以增加提取效率。其它步驟相同。 注意事項： 溶液P1（Buffer P1)在使用前先加入RNase A（全部加入），混勻，4℃保存。 漂洗液PW（Buffer PW)使用前應(yīng)加入48mL無水乙醇。 溶液P2（Buffer P2)低于室溫會產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)檢查是否出現(xiàn)渾濁，如有渾濁現(xiàn)象，50℃水浴加熱溶解。溶液P2（Buffer P2)使用后請擰緊瓶蓋。 溶液P2和P3對人體有刺激性，操作時請小心，不要直接接觸。 提取的質(zhì)粒量與細菌培養(yǎng)濃度、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。 去蛋白液PE可以有效去除殘留的蛋白污染，當宿主菌為endA+ （TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列）等核酸酶含量較高的菌株時，烈推薦使用去蛋白液PE。 操作步驟： 漂洗液PW在使用前按照試劑瓶所示體積加入無水乙醇，混合均勻。 取1～4mL過夜培養(yǎng)的菌液，加入離心管中，室溫下10000rpm離心1min，收集菌體，并盡可能地吸盡上清。 向留有菌體沉淀的離心管中加入250μL溶液P1（Buffer P1) （請先檢查是否已加入RNase A），使用移液器或渦旋振蕩器*懸浮細菌沉淀。 向離心管中加入250μL溶液P2（Buffer P2)，輕輕顛倒離心管10次以混合均勻，然后靜置5min至溶液粘稠而澄清。 注意：不要劇烈震蕩，以免造成所提質(zhì)粒中基因組DNA污染。此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠，所用時間不應(yīng)過5min，以免質(zhì)粒受到破壞。如果溶液未變得清亮，可能菌體量過多，裂解不*，應(yīng)減少菌體量。向離心管中加入250μL溶液P2，輕輕顛倒離心管混勻6～8次，使菌體充分裂解。 向離心管中加入350μL溶液P3（Buffer P3)，立即上下顛倒混勻6～8次，此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀。室溫下13000rpm離心10min。 注意：P3加入后應(yīng)立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀。 小心吸取上清液轉(zhuǎn)移到帶有收集管的吸附柱中，室溫下13000rpm離心1min，移除收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。 注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50μL，體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若后續(xù)做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0～8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率。且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。為了增加質(zhì)粒的回收率，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，再次離心收集。 向吸附柱中加入500μL溶液PE（Buffer PE)，室溫下13000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管。 注：溶液PE（Buffer PE)可以有效去除殘留的蛋白污染，當宿主菌為endA+ （TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列）等核酸酶含量較高的菌株時，烈推薦使用Buffer PE。 向吸附柱中加入500μL溶液PW（Buffer PW)（請先檢查是否已加入無水乙醇），室溫下13000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。 重復(fù)操作步驟7。 將吸附柱放入收集管中，打開蓋子，室溫下13000rpm離心5～10min，目的是將吸附柱中殘留的乙醇去除。 注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗，建議將吸附柱CM開蓋，置于室溫放置數(shù)分鐘。 將吸附柱轉(zhuǎn)移至一個的1.5mL離心管中，向吸附膜的中間部位滴加50～100μL洗脫液EB（Buffer EB)或ddH2O，室溫放置2min，13000rpm離心1min，收集洗脫液。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個人防護。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標本。同時也將標本有關(guān)信息填在標本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標本，可以放在同一個二級容器內(nèi)。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險標注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(nèi)(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標本若不能在24小時內(nèi)送達，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進行。
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
熒光定量檢測試劑盒
P450亞酶CYP1A1（EROD）活性熒光定量檢測試劑盒
體外非細胞系統(tǒng)P450亞酶CYP1A1（EROD）活性
P450亞酶CYP1A2（MROD）活性熒光定量檢測試劑盒
體外非細胞系統(tǒng)P450亞酶CYP1A2（MROD）活性
（標準品） Oxiconazole Nitrate 質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定 大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA檢測試劑盒Ratoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit 96T/48T
普（標準品） Pregabalin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定 人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)試劑盒 Human IL-2sRα ELISA Kit
(S)-(+)-苯乙醇酸（普雜質(zhì)）（標準品） [(S)-(+)-MandelicAcid] （Pregabalin impurity） 質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 英文名稱MouseTissuefactorpathwayinhibitorELISAKit小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)規(guī)格：96T/48T
（標準品） D-Sorbitol 質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 PARP蛋白共沉淀分析試劑盒5
乙二醇（標準品） Ethylene Glycol 質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 Porcineplateletactivatingfactor,PAFelisa豬血小板活化因子(PAF)elisa規(guī)格：96T/48T
降二 Nordihydrocapsaicin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥95%,標準品 小鼠甘油-3-0酸脫氫酶(GAPDH)elisa ，英文名： GAPDH ELISA Kit
4-甲氨基安替（標準品） 4-(Methylamino)-antipyrine 質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA檢測試劑盒HumanLungresistance-relatedprotein,LRPELISAKit 96T/48T
硫酸肼（標準品） Hydrazine sulfate 質(zhì)量規(guī)格：供TLC法系統(tǒng)適用性試驗用 大鼠上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)試劑盒 Rat Epithelial neuophil activating peptide 78,ENA-78 ELISA Kit
硫酸肼（標準品） Hydrazine sulfate 質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 英文名稱RatFIXELISAKit大鼠IX規(guī)格：96T/48T
（標準品） Cyclandelate 質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定 活體細胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)原位染色試劑盒(氧陰離子)100
高純度質(zhì)粒小提試劑盒(1～4mL)N-硝基-L-精甲酯 N'-Nitro-L-arginine-methyl ester 質(zhì)量規(guī)格：>98% 人不對稱二甲基精(ADMA)試劑盒 Human asymmeical dimethylarginine,ADMA ELISA Kit
N-苯甲酰-L-酪乙酯(BTEE) N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester 質(zhì)量規(guī)格：>98% 人不透光相關(guān)蛋白(OPAs)ELISA檢測試劑盒HumanOpacity-associatedproteins,OPAsELISAKit 96T/48T
AEBSF絲抑制劑 AEBSF HCl 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人布盧姆綜合征蛋白(BLM)試劑盒 Human BLM ELISA Kit
AEBSF(進分) AEBSF HCl 質(zhì)量規(guī)格：>97%,進分TCI A2215 人布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)試劑盒 Human Brucella Aibody IgG,Brucella Ab IgG ELISA Kit
鹽酸貝他定(進口) Bestatin HCl 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,美國進口 人層連蛋白/板層素(LN)試劑盒 Human Laminin,LN ELISA KIT
鄰菲啰啉鹽酸鹽，一水 1,10-Phenanthroline monohydrate 質(zhì)量規(guī)格：>99% 人層粘連蛋白-5(LN-5)試劑盒 Human Laminin-5,LN-5 ELISA Kit
膦酰二肽鈉 Phosphoramidon di salt 質(zhì)量規(guī)格：0.99 人層粘連蛋白β1(LN-β1)試劑盒 Human Laminin β1,LN-β1 ELISA Kit
癸基喃葡萄糖;癸基吡喃葡萄糖苷 Decyl β-D-glucopyranoside 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人層粘連蛋白亞基γ-2(LAMC2)試劑盒 Human LAMC2 ELISA Kit
德羅特韋(GSK-1349572,DTG) Dolutegravir,GSK1349572 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人腸道病毒71型(EV71)抗體(IgM)試劑盒 Human eerovirus 71 virus(EV71)aibody(gM)ELISA kit
十二烷基吡喃葡萄糖苷；月桂酰基喃葡萄糖 Dodecyl glucopyranoside 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人腸三葉因子(ITF)試劑盒 Human Iestinal efoil factor,ITF ELISA Kit
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
