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上海邦景實業有限公司
主營產品： 進口elisa試劑盒，細胞株，細胞系，菌種 |
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更新時間：2022-05-30 14:53:52瀏覽次數：542
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生物醫學實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細小，傳統的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統方法的缺點，本公司開發了本產品。
中文名稱：高純度質粒小提試劑盒(1～4mL)
英文名稱：Plasmid Miniprep Kit(1-4mL)
產品規格：50次
發貨周期：1～3天
產品貨號：BJ-F0163459
產品介紹：
本試劑盒通過堿裂解法裂解細胞，新型的硅基質膜專一結合DNA，在特定條件下，有效去除內毒素、基因組DNA、RNA、蛋白質等雜質。每次可抽提1～4mL菌液，抽提獲得的質粒量會受質粒拷貝數，細胞培養濃度等因素影響。由本試劑盒所得的質粒可直接用于細胞轉染，DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉錄，轉化細菌，內切酶消化等下游實驗。 保存條件： 室溫條件下，可保存12個月，更長時間保存可置于4℃。若溶液產生沉淀，可在室溫下放置一段時間，或在37℃水浴中預熱10min，以溶解沉淀。 使用建議： 如果所提質粒為低拷貝質粒或大10kb的大質粒，應加大菌體使用量，使用5～10mL過夜培養物，同時按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脫緩沖液EB應在65～70℃水浴預熱，在吸附和洗脫時可以適當的延長時間，以增加提取效率。其它步驟相同。 注意事項： 溶液P1（Buffer P1)在使用前先加入RNase A（全部加入），混勻，4℃保存。 漂洗液PW（Buffer PW)使用前應加入48mL無水乙醇。 溶液P2（Buffer P2)低于室溫會產生沉淀，使用前應檢查是否出現渾濁，如有渾濁現象，50℃水浴加熱溶解。溶液P2（Buffer P2)使用后請擰緊瓶蓋。 溶液P2和P3對人體有刺激性，操作時請小心，不要直接接觸。 提取的質粒量與細菌培養濃度、質粒拷貝數等因素有關。 去蛋白液PE可以有效去除殘留的蛋白污染，當宿主菌為endA+ （TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列）等核酸酶含量較高的菌株時，烈推薦使用去蛋白液PE。 操作步驟： 漂洗液PW在使用前按照試劑瓶所示體積加入無水乙醇，混合均勻。 取1～4mL過夜培養的菌液，加入離心管中，室溫下10000rpm離心1min，收集菌體，并盡可能地吸盡上清。 向留有菌體沉淀的離心管中加入250μL溶液P1（Buffer P1) （請先檢查是否已加入RNase A），使用移液器或渦旋振蕩器*懸浮細菌沉淀。 向離心管中加入250μL溶液P2（Buffer P2)，輕輕顛倒離心管10次以混合均勻，然后靜置5min至溶液粘稠而澄清。 注意：不要劇烈震蕩，以免造成所提質粒中基因組DNA污染。此時菌液應變得清亮粘稠，所用時間不應過5min，以免質粒受到破壞。如果溶液未變得清亮，可能菌體量過多，裂解不*，應減少菌體量。向離心管中加入250μL溶液P2，輕輕顛倒離心管混勻6～8次，使菌體充分裂解。 向離心管中加入350μL溶液P3（Buffer P3)，立即上下顛倒混勻6～8次，此時出現白色絮狀沉淀。室溫下13000rpm離心10min。 注意：P3加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。 小心吸取上清液轉移到帶有收集管的吸附柱中，室溫下13000rpm離心1min，移除收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。 注意：洗脫緩沖液體積不應少于50μL，體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若后續做測序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0～8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率。且DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。為了增加質粒的回收率，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，再次離心收集。 向吸附柱中加入500μL溶液PE（Buffer PE)，室溫下13000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管。 注：溶液PE（Buffer PE)可以有效去除殘留的蛋白污染，當宿主菌為endA+ （TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列）等核酸酶含量較高的菌株時，烈推薦使用Buffer PE。 向吸附柱中加入500μL溶液PW（Buffer PW)（請先檢查是否已加入無水乙醇），室溫下13000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。 重復操作步驟7。 將吸附柱放入收集管中，打開蓋子，室溫下13000rpm離心5～10min，目的是將吸附柱中殘留的乙醇去除。 注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應（酶切、PCR等）實驗，建議將吸附柱CM開蓋，置于室溫放置數分鐘。 將吸附柱轉移至一個的1.5mL離心管中，向吸附膜的中間部位滴加50～100μL洗脫液EB（Buffer EB)或ddH2O，室溫放置2min，13000rpm離心1min，收集洗脫液。 |
使用方法：本產品僅用于科研
注意：標本采集人員需按有關規定做好個人防護。咽、鼻拭子最好在發病的3天采集。
在安全柜內將本產品分裝到自備的、螺旋蓋內有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出。以同一拭子拭兩側鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內密封；每袋裝一份標本。同時也將標本有關信息填在標本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內。
將裝標本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內，擰緊蓋，在容器上標明有關信息。同一患者2份以上的密封標本，可以放在同一個二級容器內。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內襯具吸水和緩沖能力的物質。所有容器必須印有生物危險標注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標本若不能在24小時內送達，則應盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯系遞送標本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進行。
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
熒光定量檢測試劑盒
P450亞酶CYP1A1（EROD）活性熒光定量檢測試劑盒
體外非細胞系統P450亞酶CYP1A1（EROD）活性
P450亞酶CYP1A2（MROD）活性熒光定量檢測試劑盒
體外非細胞系統P450亞酶CYP1A2（MROD）活性
（標準品） Oxiconazole Nitrate 質量規格：HPLC法含量測定 大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA檢測試劑盒Ratoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit 96T/48T
普（標準品） Pregabalin 質量規格：HPLC法含量測定 人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)試劑盒 Human IL-2sRα ELISA Kit
(S)-(+)-苯乙醇酸（普雜質）（標準品） [(S)-(+)-MandelicAcid] （Pregabalin impurity） 質量規格：供檢查用 英文名稱MouseTissuefactorpathwayinhibitorELISAKit小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)規格：96T/48T
（標準品） D-Sorbitol 質量規格：供檢查用 PARP蛋白共沉淀分析試劑盒5
乙二醇（標準品） Ethylene Glycol 質量規格：供檢查用 Porcineplateletactivatingfactor,PAFelisa豬血小板活化因子(PAF)elisa規格：96T/48T
降二 Nordihydrocapsaicin 質量規格：HPLC≥95%,標準品 小鼠甘油-3-0酸脫氫酶(GAPDH)elisa ，英文名： GAPDH ELISA Kit
4-甲氨基安替（標準品） 4-(Methylamino)-antipyrine 質量規格：供檢查用 人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA檢測試劑盒HumanLungresistance-relatedprotein,LRPELISAKit 96T/48T
硫酸肼（標準品） Hydrazine sulfate 質量規格：供TLC法系統適用性試驗用 大鼠上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)試劑盒 Rat Epithelial neuophil activating peptide 78,ENA-78 ELISA Kit
硫酸肼（標準品） Hydrazine sulfate 質量規格：供檢查用 英文名稱RatFIXELISAKit大鼠IX規格：96T/48T
（標準品） Cyclandelate 質量規格：HPLC法含量測定 活體細胞氧化應激活性氧(ROS)原位染色試劑盒(氧陰離子)100
高純度質粒小提試劑盒(1～4mL)N-硝基-L-精甲酯 N'-Nitro-L-arginine-methyl ester 質量規格：>98% 人不對稱二甲基精(ADMA)試劑盒 Human asymmeical dimethylarginine,ADMA ELISA Kit
N-苯甲酰-L-酪乙酯(BTEE) N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester 質量規格：>98% 人不透光相關蛋白(OPAs)ELISA檢測試劑盒HumanOpacity-associatedproteins,OPAsELISAKit 96T/48T
AEBSF絲抑制劑 AEBSF HCl 質量規格：>98%,BR 人布盧姆綜合征蛋白(BLM)試劑盒 Human BLM ELISA Kit
AEBSF(進分) AEBSF HCl 質量規格：>97%,進分TCI A2215 人布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)試劑盒 Human Brucella Aibody IgG,Brucella Ab IgG ELISA Kit
鹽酸貝他定(進口) Bestatin HCl 質量規格：≥98%,美國進口 人層連蛋白/板層素(LN)試劑盒 Human Laminin,LN ELISA KIT
鄰菲啰啉鹽酸鹽，一水 1,10-Phenanthroline monohydrate 質量規格：>99% 人層粘連蛋白-5(LN-5)試劑盒 Human Laminin-5,LN-5 ELISA Kit
膦酰二肽鈉 Phosphoramidon di salt 質量規格：0.99 人層粘連蛋白β1(LN-β1)試劑盒 Human Laminin β1,LN-β1 ELISA Kit
癸基喃葡萄糖;癸基吡喃葡萄糖苷 Decyl β-D-glucopyranoside 質量規格：>98%,BR 人層粘連蛋白亞基γ-2(LAMC2)試劑盒 Human LAMC2 ELISA Kit
德羅特韋(GSK-1349572,DTG) Dolutegravir,GSK1349572 質量規格：>98%,BR 人腸道病毒71型(EV71)抗體(IgM)試劑盒 Human eerovirus 71 virus(EV71)aibody(gM)ELISA kit
十二烷基吡喃葡萄糖苷；月桂酰基喃葡萄糖 Dodecyl glucopyranoside 質量規格：>99%,BR 人腸三葉因子(ITF)試劑盒 Human Iestinal efoil factor,ITF ELISA Kit
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
