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上海聯邁生物工程有限公司
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Human soluble CD40L ELISA Kit
規格： 96T
檢測范圍：62.5pg/ml→4000pg/ml
敏感性： ＜6pg/ml
特異性： 系統和其它細胞因子無交叉反應。
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（長時間不用時）。
有效期： 6 個月（4℃）；12 個月（-20℃）。
用途： 用于體外定量分析人血清、
Human soluble CD40L ELISA Kit
規格： 96T
檢測范圍：62.5pg/ml→4000pg/ml
敏感性： ＜6pg/ml
特異性： 系統和其它細胞因子無交叉反應。
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（長時間不用時）。
有效期： 6 個月(4℃)；12 個月（-20℃）。
用途： 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞裂解液或細胞培養上清。
Human soluble CD40L ELISA Kit工作原理
CD40 ligand (CD40L),是一個 261 個氨基酸的 II 型膜受體糖蛋白質，屬于腫瘤壞死因子家族。主
要由活化 CD4+的 T 細胞合成，通過 B 細胞表面的 CD40 起著活化 B 細胞的作用。CD40-CD40L
的相互作用也起著活化單核細胞和促進樹突裝細胞的成熟。本試劑盒所用的標準品為重組人的
CD40L（從 108-261 位氨基酸），分子量 17KDa，三聚體分子量 45KDa。。
所提供的人 CD40L ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒（Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。預先包被的抗體和檢測相抗體都是多克隆抗體。檢測相
抗體經生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS 或 TBS 洗
滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過 PBS 或 TBS 的*洗滌后用底物 TMB 顯色。
TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣
品中的人 CD40L 呈正相關。
內容 | 規格 | 數量 |
預包被抗soluble CD40L 抗體的 96 孔板 | 96T | 1 |
凍干標準品 | 10ng/管 | 2 |
生物素標記 | 130ul | 1 |
親和素-過氧化物酶復合物 | 130ul | 1 |
樣品稀釋液 | 30ml | 1 |
抗體稀釋液 | 12ml | 1 |
ABC 稀釋液 | 12ml | 1 |
TMB 顯色液 | 10ml | 1 |
TMB 終止液 | 10ml | 1 |
洗滌緩沖液(25X) | 20ml | 1 |
封板膜 |
| 2 |
說明書 |
| 1 |
需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規格酶標儀。
2. 自動洗板機。
3. 恒溫箱
4. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器。
5. 干凈的試管和 Eppendof 管。
6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍，成 1X 洗滌緩沖液。
注意事項
1． 使用前 TMB 顯色液應為無色透明溶液，若發現顏色異常，請及時與廠家。
2． 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
3 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。
4． 為免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管。
5． 禁止混用不同批次試劑盒內的試劑。
6. 本公司提供的 96 孔酶標板是單條可拆型酶標板，用戶可按需求使用；剩余的酶標板請
按保存條件貯存。
7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應避免用力過大導致液體濺出。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內，浸泡 1-2 分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
樣品的準備和保存
樣品如果不立即分析，應分裝后冷凍保存，且避免反復凍融。
細胞培養上清——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固 30 分鐘，離心 1500×g 15 分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分鐘內離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進一步離心 10000×g 10 分鐘，以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細胞裂解液——對于貼壁細胞，去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常 10 秒后，細胞就會被裂解。對于懸浮細胞，離心收集細胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打把細胞吹散，用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后，10000—14000g 離心 3-5 分鐘，取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
樣品稀釋的一般原則
用戶須估計樣品待測因子的含量，決定適當的稀釋倍數，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測范圍。根據待測因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的
稀釋方案：
高——指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。
中——指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。
低——指待測因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。
特低——指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋，或按 1：2 稀釋。
操作程序總結：
1． 加樣品和標準品，37℃反應 90 分鐘。不洗。
2． 加生物素標記抗體，37℃反應 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。
3． 加 ABC，37℃反應 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。
4． TMB37℃反應 15-20 分鐘。
5． 加入 TMB 終止液，讀數。
小鼠 精氨酸酶1 Arg-1 Arginase 1
小鼠 靜止素Q6硫基氧化酶1 QSOX1 Sulfhydryl oxidase 1
小鼠 靜止素Q6硫基氧化酶2 QSOX2 Sulfhydryl oxidase 2
小鼠 巨噬細胞集落刺激因子 M-CSF Macrophage Colony-Stimulating Factor
小鼠 巨噬細胞炎性蛋白-1α MIP-1α macrophage inflammatory protein 1α
小鼠 巨噬細胞炎性蛋白2 MIP-2 Macrophage Inflammatory Protein 2
小鼠 巨噬細胞炎性蛋白3α MIP-3α;CCL20 Macrophage Inflammatory Protein 3α
小鼠 巨噬細胞炎性蛋白3β MIP-3β;CCL19 Macrophage Inflammatory Protein 3β
小鼠 巨噬細胞炎癥蛋白1β MIP-1β;CCL4 macrophage inflammatory protein 1β
小鼠 巨噬細胞移動抑制因子 MIF Macrophage Migration Inhibitory Factor
小鼠 抗IgE受體抗體 IgE receptor-Ab IgE receptor-Ab
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