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上海聯(lián)邁生物工程有限公司


Human GITR ELISA Kit

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

聯(lián)系方式:周經(jīng)理查看聯(lián)系方式

更新時間:2018-05-16 11:40:26瀏覽次數(shù):388次

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產(chǎn)品簡介

Human GITR ELISA Kit
規(guī)格: 96T
檢測范圍:62.5pg/ml→4000pg/ml
敏感性: <5pg/ml
特異性: 系統(tǒng)和其它細胞因子無交叉反應。
保存: 2-8℃(頻繁使用時); -20℃(長時間不用時)。
有效期: 6 個月(4℃);10 個月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清。

詳細介紹

Human GITR ELISA Kit
規(guī)格: 96T
檢測范圍:62.5pg/ml→4000pg/ml
敏感性: <5pg/ml
特異性: 系統(tǒng)和其它細胞因子無交叉反應。
保存: 2-8℃(頻繁使用時); -20℃(長時間不用時)。
有效期: 6 個月(4℃);10 個月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清。
Human GITR ELISA Kit工作原理
GITR(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor)糖皮質(zhì)激素誘導腫瘤壞死因子受
體,有稱為 AITR (activation-inducible TNFreceptor superfamily member) 和 TNFRSF18,GITR 是
I 型跨膜蛋白,屬于 TNF 受體家族。GITR 的胞漿處結構域與 4-1BB 和 CD27 有很大的同源性。
所提供的人 GITR ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA)。預先包被的抗體是單克隆抗體。檢測相抗體也是單克隆
抗體。檢測相抗體經(jīng)生物素(biotin)標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,
PBS 或 TBS 洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經(jīng)過 PBS 或 TBS 的*洗滌后用底
物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏
色的深淺和樣品中的人 GITR 呈正相關。

內(nèi)容

規(guī)格

數(shù)量

預包被抗GITR 抗體的 96 孔板

96T

1

凍干標準品

10ng/管

2

生物素標記

130ul

1

親和素-過氧化物酶復合物

130ul

1

樣品稀釋液

30ml

1

抗體稀釋液

12ml

1

ABC 稀釋液

12ml

1

TMB 顯色液

10ml

1

TMB 終止液

10ml

1

洗滌緩沖液(25X)

20ml

1

封板膜

 

2

說明書

 

1

需要而未提供的試劑和器材

1. 標準規(guī)格酶標儀。

2. 自動洗板機。

3. 恒溫箱

4. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器。

5. 干凈的試管和 Eppendof 管。

6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍,成 1X 洗滌緩沖液。

注意事項

1. 使用前 TMB 顯色液應為無色透明溶液,若發(fā)現(xiàn)顏色異常,請及時與廠家。

2. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。

3 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。

4. 為免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和試管。

5. 禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。

6. 本公司提供的 96 孔酶標板是單條可拆型酶標板,用戶可按需求使用;剩余的酶標板請

 按保存條件貯存。

7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應避免用力過大導致液體濺出。

洗板方法

手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內(nèi),浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

樣品的準備和保存

樣品如果不立即分析,應分裝后冷凍保存,且避免反復凍融。

細胞培養(yǎng)上清——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固 30 分鐘,離心 1500×g 15 分鐘,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血,抽血后 30 分鐘內(nèi)離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進一步離心 10000×g 10 分鐘,以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細胞裂解液——對于貼壁細胞,去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液,用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常 10 秒后,細胞就會被裂解。對于懸浮細胞,離心收集細胞,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液,用槍吹打把細胞吹散,用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后,10000—14000g 離心 3-5 分鐘,取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

樣品稀釋的一般原則

用戶須估計樣品待測因子的含量,決定適當?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測范圍。根據(jù)待測因子含量高、中、低的不同,分別采取不同的

稀釋方案:

高——指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1:100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。

中——指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1:10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。

低——指待測因子在 31.2-2000pg/ml。按 1:2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。

特低——指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋,或按 1:2 稀釋。

操作程序總結:

1. 加樣品和標準品,37℃反應 90 分鐘。不洗。

2. 加生物素標記抗體,37℃反應 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。

3. 加 ABC,37℃反應 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。

4. TMB37℃反應 15-20 分鐘。

5. 加入 TMB 終止液,讀數(shù)。

小鼠 前列腺素A1 PGA1 Prostaglandin A1

小鼠 II型膠原酶 II-C Collagenase II

小鼠 γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)運體 GAT1 Gamma amino acid transporter

大鼠 1,25-二羥基維生素D3 1,25(OH)2D3 1,25-dihydroxyvitamin D3

大鼠 1,4,5-三磷酸肌醇 IP3 inositol 1,4,5,-trisphosphate

大鼠 11β羥基類固醇脫氫酶1 11β-HSD1 11 β - hydroxysteroid dehydrogenase 1

大鼠 16α羥基雌酮1 16-αOHE-1 16-αOHE-1

大鼠 17β-雌二醇 17β-E2 17β-Estradiol

大鼠 17-羥皮質(zhì)類固醇 17-OHCS 17-hydroxycorticosteroid

大鼠 17羥孕酮 17-OHP 17-Hydroxyprogesterone

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