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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-05-24 12:40:50瀏覽次數(shù)：264次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線A549/DDP人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株這株細胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細胞耐藥亞株。
英文名稱：Human Non - small cell lung cancer cell Resistant Sub - strains
1） 來源：肺癌
2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者
A549/DDP人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株
英文名稱：Human Non - small cell lung cancer cell Resistant Sub - strains
規(guī)格：1*10 6
細胞介紹
這株細胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細胞耐藥亞株。
一、細胞特性
1） 來源：肺癌
2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、細胞收到后處理
A549/DDP人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
三、細胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
（1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
★ 注：如運輸過程中導(dǎo)致細胞污染或者死亡，我們將無條件補發(fā) 收貨后十個工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價重發(fā)。
相關(guān)細胞系列表：
人乳腺癌細胞（上皮粘性蛋白基因修飾）；Ecad231-9 人源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
人乳腺癌細胞（紅色熒光蛋白標(biāo)記）；MDA-MB-231-Red3 人源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
人骨肉瘤細胞；HOS 人源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細胞；HCT116-GFP 人源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
犬腎細胞；MDCK/IgR 犬 1×10^6 細胞數(shù)/ml
小鼠胚胎成纖維細胞（HNP抗性）；HNPMEF(CF-1) 小鼠源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
正常大鼠腎細胞；NRK 大鼠源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
小鼠前胃癌低轉(zhuǎn)移細胞（綠色熒光蛋白標(biāo)記）；MFC-B5-GFP 小鼠源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
正常大鼠腎細胞（EGF受體陽性）；NRK49F 大鼠源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
人結(jié)腸癌細胞；NCI-H508 人源 1×10^6 細胞數(shù)/ml
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