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更新時(shí)間：2018-06-08 14:45:34瀏覽次數(shù)：293次
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一站式磁珠法動(dòng)物mRNAOUT 構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測(cè)稀有的mRNA等研究常 常需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly（A）尾 巴，所以可以通過與包被有Oligo（dT）的磁珠結(jié)合而與其他RNA（如rRNA、tRNA 等）分離開。本產(chǎn)品專門用于從動(dòng)物組織中提取mRNA，其操作原理如下
它具有下列特點(diǎn)：
1. 一站式，由柱
一站式磁珠法動(dòng)物mRNAOUT
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
一站式磁珠法動(dòng)物mRNAOUT | 50次 | 1590元 |
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構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測(cè)稀有的mRNA等研究常 常需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly(A)尾 巴，所以可以通過與包被有Oligo(dT)的磁珠結(jié)合而與其他RNA（如rRNA、tRNA 等）分離開。本產(chǎn)品專門用于從動(dòng)物組織中提取mRNA，其操作原理如下
它具有下列特點(diǎn)：
1. 一站式，由柱式RNA提取試劑和mRNA提取試劑兩個(gè)產(chǎn)品整合而成，即開即用， 非常方便。
2. 一次可以處理50-100 mg的動(dòng)物組織，能得到約10-15 μ g總RNA，從中可得 0.1-0.5 μ g左右的mRNA。
3. Oligo(dT)磁珠吸附能力強(qiáng)，每mg磁珠可吸附500 ug的RNA。
4. 磁珠法mRNA提取，過程操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)少、提取效率高，免去了常規(guī)的灌柱、 洗柱等繁瑣操作。
5. 得到的mRNA可以直接用于構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相， 離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
相關(guān)產(chǎn)品列表：
冰袋
無內(nèi)毒素水
DN*CTAB溶液，20%
DN*EDTA溶液,0.5M,PH8.01
DN*75%乙醇
DN*鹽酸胍溶液，8M
DN*異硫氰酸胍溶液，5M
DN*PVP K30溶液，20%
DN*Sarkosyl溶液，10%
DN*SDS溶液，10%
DN*乙酸鈉，pH5.2，3M
DN*Tris HCl，1M，pH6.5
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