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所 在 地上海市
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更新時(shí)間：2018-06-11 21:05:55瀏覽次數(shù)：292次
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革氏陽(yáng)性細(xì)菌質(zhì)粒DNAout本試劑盒是用于革氏陽(yáng)性細(xì)菌（G+）質(zhì)粒DNA小量制備與純化的試劑盒。G+菌體先經(jīng)堿裂解法處理，再通過(guò)離心吸附柱，專(zhuān)一結(jié)合DNA，后洗去雜質(zhì)，高效快速提取質(zhì)粒DNA，全套操作可以在30分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從1-5 mL過(guò)夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá)20 μg的高純度質(zhì)粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及PCR等。
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革氏陽(yáng)性細(xì)菌質(zhì)粒DNAout
名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
革氏陽(yáng)性細(xì)菌質(zhì)粒DNAout | 50次 | 390元 |
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本試劑盒是用于革氏陽(yáng)性細(xì)菌（G+）質(zhì)粒DNA小量制備與純化的試劑盒。G+菌體先經(jīng)堿裂解法處理，再通過(guò)離心吸附柱，專(zhuān)一結(jié)合DNA，后洗去雜質(zhì)，高效快速提取質(zhì)粒DNA，全套操作可以在30分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從1-5 mL過(guò)夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá)20 μg的高純度質(zhì)粒DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0)，可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及PCR等。
1. 快速、步驟少，整個(gè)操作在半個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成。
2. 不需要預(yù)平衡離心吸附柱。
3. 洗柱液即開(kāi)即用，不需要額外加乙醇。
4. 純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒OD比值在1.8-2.0之間。
5. 產(chǎn)量高，每毫升過(guò)夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到2-5 μg/mL。
6. 用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。
7. 價(jià)格低，比多數(shù)國(guó)內(nèi)同類(lèi)產(chǎn)品的價(jià)格更便宜。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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