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上海聯(lián)邁生物工程有限公司


一管式DNA膠回收試劑盒

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一管式DNA膠回收試劑盒本產(chǎn)品是聯(lián)邁基因*開(kāi)發(fā)的革命性的DNA膠回收試劑,其大特點(diǎn)是可以直接從溶化的瓊脂糖凝膠中沉淀回收DNA,不使用離心吸附柱,沒(méi)有樣品轉(zhuǎn)移過(guò)程,所以它能將對(duì)DNA的機(jī)械拉力降低到低,尤其適合于回收長(zhǎng)達(dá)5-50kb的大片段DNA(常規(guī)的離心吸附柱不能有效回收5Kb以上DNA)。
1. 一管式操作,不需要離心吸附柱,過(guò)程中不需要轉(zhuǎn)移樣品,對(duì)DNA的機(jī)械破壞小。
2. 適合于回

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一管式DNA膠回收試劑盒

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一管式DNA膠回收試劑盒

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本產(chǎn)品是聯(lián)邁基因*開(kāi)發(fā)的革命性的DNA膠回收試劑,其大特點(diǎn)是可以直接從溶化的瓊脂糖凝膠中沉淀回收DNA,不使用離心吸附柱,沒(méi)有樣品轉(zhuǎn)移過(guò)程,所以它能將對(duì)DNA的機(jī)械拉力降低到低,尤其適合于回收長(zhǎng)達(dá)5-50kb的大片段DNA(常規(guī)的離心吸附柱不能有效回收5Kb以上DNA)。
1. 一管式操作,不需要離心吸附柱,過(guò)程中不需要轉(zhuǎn)移樣品,對(duì)DNA的機(jī)械破壞小。
2. 適合于回收從100bp到50kb的各種大小的DNA片段,包括用常規(guī)離心吸附柱方法不能有效回收的5 kb以上的質(zhì)粒,BAC、基因組DNA等片段。
3. 快速,整個(gè)過(guò)程不到15分鐘(對(duì)一個(gè)樣品而言),由溶膠(3分鐘),放置(2分鐘),沉淀(5分鐘)和兩次洗滌(各1-2分鐘)幾步組成。
4. 純度高,回收產(chǎn)物可以直接用于連接、酶切、PCR、測(cè)序等各種反應(yīng),不影響后續(xù)酶反應(yīng)。
5. 回收率高,一般在大于50%。
6. 既可用于回收單雙鏈DNA,又可用于回收單雙鏈RNA。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過(guò)離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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