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上海聯邁生物工程有限公司
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綠如藍染料，PCR級第二代的非飽和型熒光染料（如SYBR Green I）在高濃度下會抑制熒光PCR，所以反應重復性很不穩定，并且不能用于要求嚴格的Tm分析。本產品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一樣，是第三代飽和型熒光染料，具有下列特點：
1. 飽和濃度不抑制PCR反應，因此得到的熒光信號更強。
綠如藍染料，PCR級
名稱 | 規格 | 價格 | 手冊 |
綠如藍染料，PCR級 | 0.1mL | 197元 |
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第二代的非飽和型熒光染料（如SYBR Green I）在高濃度下會抑制熒光PCR，所以反應重復性很不穩定，并且不能用于要求嚴格的Tm分析。本產品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一樣，是第三代飽和型熒光染料，具有下列特點：
1. 飽和濃度不抑制PCR反應，因此得到的熒光信號更強。
2. 抗水解、抗熱解和抗光解的能力強于目前常用的SYBR Green I。
3. 飽和濃度下染料分子沒有機會發生移位，熒光強度跟DNA變性程度呈線性關系，可以用于精細的Tm測定實驗（如High-resolution melting curve analysis）。
4. 跟目前常用的PCR儀器兼容（包括iCycler、LightCycler、ABI 測序儀）。激發和發射光譜跟FAM和SYBR Green I接近，可以使用SYBR Green I的光學設置參數。
5. 不能滲透進入細胞內，毒性和致突變性遠低于SYBR Green I。
6. 使用簡單，加入到PCR溶液中即可。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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